分子生物学实验（吉林大学）分子生物学实验基本技术训练.pptVIP

PCR技术（多聚酶链式反应） PCR是采用分子技术模拟核酸在体内的复制，实现DNA体外扩增，以获得大量DNA片段供研究需要。 94℃ 4min 94℃ 30S 50℃ 30S 30个循环 72℃ 60S 72℃ 10min 4℃ 保存 End 电泳技术（琼脂糖电泳） 分类： 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 醋酸纤维膜电泳 …… 琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶的异同 琼脂糖凝胶浓度与线性DNA的最佳分辨范围 在DNA双螺旋结构中碱基处于双螺旋结构的内部，呈平面结构，垂直于螺旋轴成对排列。糖基—磷酸脂基构成主链暴露在外表面，并带有磷酸脂基的负电荷。 DNA分子电泳时的迁移速度与凝胶孔径和所带电荷量成正比，与分子大小成反比。 样品缓冲液： 盐类（维持样品）、甘油（增加重量从而使样品下沉至点样孔）、以及示踪染料（以便监测电泳进程）。例如 6×Loading Buffer：30%(v/v)甘油，0.25%（w/v) 溴酚蓝，0.25%（w/v)二甲苯腈蓝，蒸馏水配置。 电泳缓冲液： 　凝胶中所加的缓冲液应该与电泳槽中的相一致． 　琼脂糖凝胶电泳最常用的缓冲液是TAE (Tris-醋酸－EDTA）与TBE (Tris-硼酸－EDTA）。 电源：稳压、稳流、稳功率。 样品制备