免疫学实验（吉林大学）利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达.docVIP

项目名称 利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达 经 费 1500（元） 起止时间 2016年6 月至 2016 年 12月 负责人 学号 姓名 年级 专业 联系电话 E-mail 2013级 制药工程 一、立项背景和依据（包括研究目的、国内外研究现状分析、研究意义，应附主要参考文献） （一）研究目的 INMAP（interphase nucleus and mitotic apparatus protein）是一种保守的纺锤体相关蛋白[1-2]，为了制备高特异性的INMAP多克隆抗体和研究INMAP在肝癌细胞中的表达差异，本研究通过原核诱导表达重组蛋白、尿素处理包涵体，用镍亲和柱分离纯化的融合蛋白免疫小鼠，获得特异性较高的INMAP多克隆抗体，拟为制备INMAP多克隆抗体提供一种经济、便捷的方法，同时也为细胞恶性增殖机理和抑癌途径的探究奠定基础。[3-4] （二）国内外研究现状分析 多克隆抗体以其能与靶分子特异结合的优良特性，已在疾病的基础研究、诊断和治疗领域取得了广泛的应用，并发挥着重要的作用。[5] 多克隆抗体研究经历了多克隆抗体-单克隆抗体-基因工程抗体的漫长历程之后，目前已经已经进入了人源化抗体、全人抗体、小型化工程抗体、多功能抗体并存的新时代。[6]目前抗体在肿瘤、自身免疫疾病、感染性疾病、心血管疾病的诊断和治疗均取得了广泛的应用，成为这些疾病的辅助诊断、鉴别诊断、早期诊断以及分型、判断 预后、监测治疗最重要的工具之一，也是这些疾病个体化靶向治疗药物的主力军之一。 随着基因组学和蛋白组学的快速进展，新的标志物和靶分子大量涌现，抗体研制和应用也向着抗原更加多样化、抗体或其偶联物的功能多样化、高通量的快速实时检 测和联合应用等方向发展。[7] （三）研究意义 功能研究表明INMAP在纺锤体形成、着丝粒蛋白（CENP-B）保持完整性等方面发挥重要作用，跟染色体精确分离息息相关，影响肿瘤细胞的生长命运和增殖属性。[8-9]获得特异性较高的INMAP多克隆抗体，拟为制备INMAP多克隆抗体提供一种经济、便捷的方法，同时也为细胞恶性增殖机理和抑癌途径的探究奠定基础。 （四）主要参考文献 [1] Zhou Y L, Chen Z, Lei Y, et al. INMAP, a novel truncated version of POLR3B, represses AP-1 and p53 transcriptional activity[J]. Molecularand Cellular Biochemistry, 2013, 374(1/2): 81-89. [2] Shen E Z, Lei Y, Liu Q, et al. Identification and characterization of INMAP, a novel interphase nucleus and mitotic apparatus protein that is involved in spindle formation and cell cycle progression[J]. Experimental Cell Research, 2009, 315(7): 1100-1116. [3] Tan T, Chen Z, Lei Y, et al. A regulatory effect of INMAP on centromere proteins: Antisense INMAP induces CENP-B variation and centromeric halo[J]. PloS One, 2014, 9(3): e91937. [4] Wei Y, Shen E Z, Zhao N, et al. Identification of a novel centrosomal protein CrpF46 involved in cell cycle progression and mitosis[J]. Experimental Cell Research, 2008, 314(8): 1693-1707. [5] Uhlen M, Forsberg G, Moks T, et al. Fusion proteins in biotechnology [J]. Current Opinion in Biotechnology, 1992, 3(4): 363-369. [6] Wang R, Shen W B, Liu L L, et al. Prokaryotic expression, purification and characterization of