Cecropin+B基因在毕赤酵母中的高效表达以及生物活性的研讨.pdfVIP

其他论文 然疫源地起到了促进作用。因此了解各地区不同鼠种对斑点热的带菌率，对于有的放矢的制 订斑点热的防制措施具有重要的流行病学意义。 参考文献略 应用眼镜王蛇基因疫苗制备单克隆抗体的研究 李丽红2，范泉水’，李作生1．，邱薇1，张富强1，于福先2，郑颖1l，黄勇1l，李刚山1 (1成都军区军事医学研究，云南，昆明650032；2云南农业大学动物科技学院，云南，昆明) 毒蛇的危害是众所周知的，每年都有数以万计的野外工作者受到毒蛇的攻击。蛇伤防治 的关键是及时准确有效的治疗，现有的诊断试验，特异性不强，易出现假阳性；在不明蛇种 的情况下只能大剂量使用多价抗蛇毒血清治疗，易出现过敏反应。为了及早鉴别蛇种，迅速 使用特异性的抗血清，用特异性单抗作诊断是非常重要的。另外，对易受毒蛇攻击的高危人 群提前注射基因疫苗可以提高机体的特异性免疫水平，即使达不到完全保护，也可为抗血清 hannah，Oh．)，属于主动进攻性毒蛇，排毒量大，且毒 治疗赢得时间。眼镜王蛇(Ophiophagus 力强，被其咬伤中毒发病急，发展迅速，致死、致残高，早确诊早治疗是降低该类毒蛇咬伤、 致死、致残的关键。Oh．3基因是眼镜王蛇主要的毒性基因，可以诱导机体产生中和抗体。 本研究将Oh．3基因克隆到真核表达载体中，构建真核表达质粒plRES-Oh3，佐以脂质体免 疫Balb／e小鼠，取其脾细胞与同源SP2／0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA筛选，有限稀释 验和间接ELISA证明2株MeAb可与眼镜王蛇毒反应。小鼠中和实验证明，2株McAb诱 生的腹水可中和眼镜王蛇毒，McAb活性为1：50～-100，2株McAb具有协同中和活性，其 协同中和效价大于1：100。用眼镜蛇科其它3种蛇毒(眼镜蛇、金环蛇、银环蛇)抗原分别 包被酶标板，然后分别加入制备的2株McAb，进行间接ELISA检测，结果表明：2株McAb 不与其它3种蛇毒发生交叉反应。基因疫苗免疫小鼠的攻毒实验结果显示：plRES．Oh3免疫 的小鼠，攻毒后死亡时间比未免疫的对照组延长4-6小时，这表明该基因疫苗有一定的保 护性。研Iiiii镜王蛇基因疫苗及单克隆抗体的制备为临床诊断、治疗及新药开发提供了技术 支持。 B基因在毕赤酵母中的高效表达以及 Cecropin 生物活性的研究 王秀青曾瑞兵周斌陈溥言※ (南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095) B通过SOE法合成，并在 擅翼：用毕赤酵母真核系统表达有抑茵活性的家蚕抗茵／g(cecropinB1．Ceeropin 表达产物可以在a信号因子的引导下，分泌到培养基中，且表达产物具有明显抑茵活性。酸碱稳定性实验结果 B100℃加热5 显示，所表述的cecropinB在pH等于3．5时仍然有很好的活性，热稳定性实验显示，ceeropin 分钟，仍有活性，基于这样的特性该抗茵肽有望在饲料和食品添加荆中得到很好的应用． 关■词；家蚕抗茵肽：毕赤酵母；分泌表达；抑菌活性；SOE 抗菌肽(Antibacterialpeptide，ABP)是生物体内经诱导而产生的一种具有生物活性的小分 子多肽，分子量在2000～7000 Da左右，由20-60个氨基酸残基组成。Cecropins是其中的一类， 由37～39个氨基酸组成，相对分子质量约4000Da,具有广谱的抗菌能力和抗病毒活性。 -648． 第六届理事会第二次会议暨教学专业委员会2006年会议论文集 CecropinB(天蚕素B)最早是由Boman从天蚕体内分离得到的，是一类热稳定和广谱抗菌的可 溶性多肽【ll。是已分离的众多抗菌肽中抗性较强的一种12J。它不仅对一些革兰氏阳性茵及阴 性菌有很高的抗菌活力，而且对真菌、原虫、某些病毒和一些肿瘤细胞也有明显的杀伤作用， 值得一提的是抗菌肽对真核细胞几乎没有破坏作用，这可能与细胞膜和骨架上的组成有关13J。 抗菌肽对细菌具