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真菌感染的两项新的检测项目简介 感染性疾病相关的实验室检测 机体反应性指标的检测：体温、CRP、血沉、白细胞计数和分类、免疫球蛋白分析… 病原微生物相关的检查 1）病原微生物的直接分离培养、涂片。 2）病原微生物组分的检测 3）病原体抗原成分的检测 目前常用的真菌感染检测方法 深部真菌感染的临床表现 深部真菌感染影像学特征 微生物学检查 主要包括两方面: 直接涂片镜检和真菌培养. 分子生物学检测 -- 真菌DNA的检测 真菌抗原检测 半乳甘露聚糖(GM),分布于大多数曲霉属真菌胞壁中 真菌细胞壁组分检测 (1,3)-β- D-葡聚糖 (1,3)-β- D-葡聚糖检测 微生物细胞壁结构组分 1.革兰阴性菌的主要细胞组分：外膜（脂多糖等） 2.真菌细胞壁的主要组分： (1-3)-?-D-葡聚糖、甲质壳和纤维素。 3. 革兰阳性菌细胞壁的主要组分：肽聚糖 （通过对肽聚糖的定量测定来检测G+菌感染和严重程度。试剂目前还需要进口，未能国产化,检测受到一定的限制） 真菌细胞壁结构示意图 葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占其干燥重量的80%～90%。 其中1-3-β-D糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链，分支状1-6--β-D 葡糖糖残基作为侧链。 对于1-3--β-D葡聚糖在深部真菌感染中的作用，Yoshida M[2]等认为可能与内毒素在革兰阴性杆菌感染中的作用类似，但目前暂未明了。 细菌细胞壁组分检测原理 鲎试剂就是鲎血细胞的提取物，能与细菌的内毒素发生反应，也可以同(1-3)-?-D-Glucan发生反应。 (1-3)-?-D-Glucan检测原理 用非离子性表面活性剂和多粘菌素B的前处理液抑制标本中的内毒素活性，鲎试剂 (1-3)-?-D-Glucan发生反应。然后用比浊时间分析法测定其浓度。 检测步骤 在含有非离子性表面活性剂和多粘菌素B的前处理液的试剂中加入标本，70℃加热10分钟，使内毒素的活性受到抑制，该前处理液也可同时使血液中的蛋白类干扰物质失活，经前处理的标本和鲎试剂发生胶化反应，在胶化的过程中伴随着浊度的改变而导致透过光量的变化，检测该变化可得出(1-3)-?-D-Glucan的浓度。 (1-3)-?-D-Glucan诊断意义 真菌在自然界中分布很广,其细胞壁主要成分为(1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖). 深部真菌感染: 是指侵犯机体皮下组织, 内脏器官及中枢神经系统的真菌性疾病. 目前, 深部真菌感染已成为免疫功能低下患者发病和死亡最常见的原因。常见有念珠菌病、孢子丝菌病、隐珠菌病、曲霉病、毛霉菌病、马尔尼菲青霉菌病、组织孢浆菌病以及球孢子、副球孢子菌病等临床病症. 当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理，1-3-β-D葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液（如尿、脑脊液，腹水，胸水等）中1-3--β-D葡聚糖含量增高。 当真菌在体内含量减少时，机体免疫可迅速清除1-3--β-D葡聚糖。而在浅部真菌感染中，1-3--β-D葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。 有研究报道葡聚糖在念珠菌血症时明显升高，将其用于念珠菌血症的早期诊断明显优于传统的培养法和血清学诊断试验[3-4]。 另据文献报道，检测葡聚糖含量不能用于隐球菌感染的诊断[1]，可能因为隐球菌在免疫缺陷患者体内生长缓慢，并形成厚荚膜。有体外实验表明，新生隐球菌产生的1-3--β-D葡聚糖量比念珠菌和曲霉菌少。 但也有文献报道新生隐球菌感染后血清葡聚糖升高也十分明显[5]。所以，有关隐球菌感染后葡聚糖的变化还有待进一步试验验证。 病例2 患者乙，男, 41岁, 因双下肢关节疼痛1月余, 发热、咳嗽、痰血10余天于2006年9月12日入院. 入院前曾予以青霉素抗感染治疗, 无好转, 随后出发现, 体温在39度左右波动, 并有咳痰, 痰中血丝症状. 胸部CT检查, 发现左肺阴影 入院后9月18日进行支气管镜检查及作病理活检, 显示肺左上方叶管口真菌感染. 诊断为侵袭性肺曲菌病. 实验室检查: 入院当天化验血常规显示白细胞 10.1*109/L (中性粒细胞71%, 淋巴细胞18.2%, 单核细胞9.3%). 血沉加快, C反应蛋白(CRP)和降钙素原均升高. 9月14日痰培养结果为阴性. 9月22日再一次进行痰培养和血浆(1,3)-β-葡聚糖检测, 培养结果依然为阴性但血浆(1,3)-β-葡聚糖检测为阳性 (1806 pg/ml). 治疗 入院后给予哌拉西林/他唑巴坦和西米替丁作抗菌治疗, 高热未有好转, 随后9月21日给予氟康唑静点, 高热好转, 体温在37度左右波动, 以后继续予以抗真菌治疗, 情况逐渐好转, 9月30日出院. 对葡聚糖检测结果评价的困难 存在多种方法，在相同条件下检测结