实验六 血清alt活性测定1-课件PPT.pptVIP

实验六 血清ALT活性测定 一、何谓ALT？ 谷丙转氨酶 （glutamic pyruvic transaminase，GPT） 丙氨酸氨基转移酶 （alanine aminotransferase，ALT） 复习： 反应式 大多数氨基酸可参与转氨基作用，但赖氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。 二、ALT催化的化学反应: 丙氨酸 +α-酮戊二酸 丙酮酸 + 谷氨酸 ALT 三、ALT的分布: 主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等，血清中的含量很低。 病变时，细胞受损，血清ALT含量升高。 四、ALT测定的临床意义： 作为（肝脏）疾病诊断和预后判断的指标之一。 五、测定血清ALT的方法： King法（金氏法） Reitman法（赖氏法） Mohun法（穆氏法） 1981年全国生化检验方法学讨论会确定用赖氏法（改良）作为临床首选，单位为：卡门氏单位 。 丙氨酸 +α-酮戊二酸 丙酮酸 + 谷氨酸 ALT（血清） 基质液 在一定反应条件下 ( pH7.4，37℃ ) , 作用 30 min： 三、原理 ： α-酮戊二酸 丙酮酸 + 2,4 二硝基苯肼 α-酮戊二酸-2,4二硝基苯腙 丙酮酸-2,4 二硝基苯腙 两者在 碱性条件下 呈 红棕色 ，等摩尔浓度条件下，丙酮酸 OD 值 大 a-酮戊二酸 3倍。 四、试剂：省略 2、按下表操作： 加入物 （ml） 对照管 (B) 测定管 (U) 血清 0.1 0.1 基质缓冲液 — 0.5 混匀，37℃水浴30min（准确记时） 2,4—二硝基苯肼溶液 0.5 0.5 基质缓冲液 0.5 — 混匀，37℃水浴20min； 各管加入0.4 M NaOH 5.0 ml，室温放置10 min； 在波长505 nm 处，以蒸馏水校正零点，读取各管吸光 度；根据 (AU--AB) 标准曲线，得到酶活性的卡门氏单位数。 1、将 基质缓冲液 和 血清 在 37℃ 水浴箱 预温5min。 五、操作步骤： 3、标准曲线的绘制： 管号 0 1 2 3 4 磷酸盐缓冲液（ml） 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 丙酮酸标准液（ml） — 0.05 0.10 0.15 0.20 基质缓冲液（ml） 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 相当于酶活性 （卡门氏单位） — 28 57 97 150 各管加 2,4-二硝基苯肼溶液0.5 ml，混匀，37℃水浴 20min； 各管加 0.4 mol/L NaOH溶液5.0 ml，混匀，室温放置10min。 波长505 nm处比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度； 各管读数均减去0号管吸光度，所得差值与对应的卡门氏酶活性单位作图即成标准曲线。