猪繁殖与呼吸综合征DNA疫苗的免疫效力和安全性评价.pdf

摘要 猪繁殖与呼吸综合征(porcine and syndrome，PRRS)是以母猪 reproductiverespiratory 繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为特征的传染病，对养猪业危害严熏。猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRsv)侵害免疫系统并且易发生变异，常规的疫苗难以产生理想的效果，所以，研制 安全有效的基因工程疫苗具有重要的意义。 本研究将表达PRRSV GP5蛋白的DNA重组质粒pCl—GP5分别与表达猪IL．2和IL一4 分猪只，通过质粒残留试验、染色体整合试验、抗双链DNA(dsDNA)抗体检测和质粒在 HB-2株， 环境中释放的可能性试验，综合评价DNA疫苗的安全性；同时人工感染PRRSV 检测仔猪的体液免疫以及攻毒保护性反应，评价pcl电p5的免疫效力及peDNA．1L．2乖I pcDNA．IL-4的免疫佐剂效应。 安全性检测结果表明，DNA疫苗免疫仔猪后不会引起病理性损伤：通过PCR方法检测 霆组质粒在猪体内的残留及分布，结果三免后15天在脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏 和注射部位肌肉等组织器官中能检测到目的片段，第42天阳性组织检出率明显减少；重组 质粒不与宿主细胞染色体整合；免疫后也不产生抗dsDNA抗体；并且未在环境中发生扩散。 免疫效力检测证实．pcI-GP5可诱导免疫猪产生抗GP5抗体，ELISA抗体效价最高可 达1：285。中和抗体效价达l：19。三免后攻毒，组织中PRRSV核酸的检出率下降30．3％， 与对照组相比差异显著(p哟．05)。pcm帆·IL-2与pCI由Ps联台免疫后，可将中和抗体效价 提高到1：24+5；病毒血症的出现频率减少38．9％，PRRSV阳性组织检出率下降28．8％，与 对照组相比差异显著(p0．05h 可达1：320，中和抗体效价可达1：24．1。病毒斑症的出现频率下降38．9％，PRRSV阳性组织 检出率减少34．8％，与对照组相比差异极显著(p0．01)。 本研究初步证明PRRS DNA疫苗pCl旬p5在仔猪体内及环境中是安全的，pcl．GP5对 猪的免疫保护力稳定，真核表达的猪细胞因子pcDNA-lt以与peDNA．IL．4能够显著增强 pCl-GP5的免疫保护力，以上研究为该疫苗用于猪群临床研究提供了详实的数据。 关键词：PRRSV：DNA疫苗；细胞园子佐帮；安全性评价i免疫效力检测 Abstract Porcine and failurein reproductiverespiratorysyndrome(PRRS)，characterizedbyreproductive SOWSand severe in a diseasewith gilts，and pneumonianurserypiglets，ishighlycontagious worldwide severe to economiclossestheswine distribution，causing industry．Porcine and thecausative reproductiverespiratorysyndromevirus(PRRSV)isagent．PRRSVnaturally infects and vaccines traditionaldontwork ofsafe macrophages very