环介导等温扩增技术在下呼吸道感染病原菌诊断上的应用.pdf

摘要 摘要 isothermal 目的：建立一种运用环介导等温扩增(100p．mediated amplification， LAMP)技术检测和鉴定常见下呼吸道感染病原菌的方法，以提高临床检测病 原菌的速度及准确性。证实其在诊断上的应用价值。 方法：1．确定常见下呼吸道感染11种病原菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球 菌、大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄 食单胞菌、流感嗜血杆菌、嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体；2．通过 X和Primer5．O程序，对各病原菌菌株的基因保守区进行序列分 BLAST、Align 析，设计并合成本试验所需的引物；3．收集我院诊断为下呼吸道感染的50例患 者痰标本；3．提取各标本中病原体DNA；4．将提取的D删行环介导等温扩增 技术扩增，放入实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)仪65℃反应45分钟，行荧光 方法检测，测定熔解曲线，进行数据分析；5．对检测体系的灵敏度和特异性进 行测试；6．利用该检测方法对50例临床诊断为下呼吸道感染的痰标本进行 LAMP法检测，与传统的痰常规细菌培养法进行比较分析。 下呼吸道感染常见11种病原菌无交叉反应，表明探针具有较高的特异性； 3．LAMP检测的阳性率为82．O％，较常规细菌培养的阳性率高；4．LAMP技术能 检测出多数浓度较低的样品细菌或者难培养的细菌。 结论：本研究初步建立的下呼吸道感染病原菌LAMP技术能够准确、敏感、 快速、高效地检测痰标本中的病原菌，为进一步完善和建立下呼吸道感染病原 菌的LAMP基因芯片检测技术打下了基础。 关键词：LAMP：下呼吸道感染；病原学 玎 Abstract ABSTRACT To for theclinical ofLAMPcommonlower Objectivestudy application respiratory tract infection bacterium the and of pathogenic detection，improvespeedaccuracy bacteriadetection．Toconfirmitutilizationvaluein lower tract diagnosis respiratory infection． 11 of MethodsDefinited conlnlonlower tractinfection species respiratory tothe oflower tractinfection pathogenic analysis respiratory bacterium．According bacteriumconservative a of bacteria’S pathogenic genes,wedesignedpair every LAMP use