第7章花药培养及单倍体育种PPT.ppt

烟草、茄子 3～5°C 3d 水稻 10°C 10～14d 柑橘 3°C 5～10d 马铃薯 4°C 2d 小麦 1～3°C 7～14d ①低温处理：是最常用的一种预处理方法。 Ⅰ：物理因素处理 低温处理的作用 降低了小孢子新陈代谢，延长花粉的寿命,中断正常的配子体发育，促进花药营养成分的转运； 低温能改变纺锤丝的轴向, 破坏纺锤丝的微管蛋白而阻止纺锤丝形成，打破有丝分裂正常过程, 导致细胞分化； 阻止了细胞在预处理时的细胞周期，一旦培养在25度-28度下重新返回有丝分裂； 低温、饥饿胁迫作用。 ②高温预处理： 小麦：32-33°C，培养3～8d，再转到26-28°C正常培养。 油菜：30°C，培养2～3d 玉米：30°C，14d，再转到27°C培养，能促进体胚的形成 。 ③射线处理：Y射线 、激光 、氦氖原子等。 ④离心法 毛叶曼陀罗：离心+低温处理 小麦：接种前幼穗2000转/min，20min Ⅱ：化学因素处理 ①供体植株预处理 ：乙烯 、化学杀雄剂。 ②添加到培养基中的预处理： 水稻：秋水酰碱、乙烯利+低温处理 小麦：放线菌素D，处理1-2d ③甘露醇预处理：是最常用的一种化学预处理方法。 方法：将花药或游离收集的花粉粒，先培养在甘露醇水溶液中适宜的时间，再转入正常的诱导培养基中进行培养。 优点：缩短了花药的预处理时间，促进花粉粒的释放，可在一般条件下进行。 大麦花药：32g/L甘露醇，4d，效果优于4℃，14d的低温处理。 甘露醇预处理的作用 不易降解, 通过维持细胞内部渗透压的平衡。 比低温预处理明显提高花药存活率。 一定的渗透压可以破坏前胚期细胞的胞间连丝。 温度和甘露醇预处理能引发饥饿作用。推论碳饥饿是启动雄核发育的重要因素。 预处理引发了小孢子细胞内源激素、酶活性等一系列生理生化变化，可能作为一个信号或刺激启动小孢子发育方式的转换，导致小孢子细胞离开配子体发育途径而转向孢子体发育途径。 2、花药接种及诱导培养 （1）表面消毒和接种 接种前，需要对预处理过的幼穗或花蕾进行表面消毒。通常对整个幼穗或花蕾进行消毒处理，消毒后的材料应立即接种。 在超净工作台上，小心剥取整个花药，接种于培养基中。 接种密度 花药对离体培养的反应存在“密度效应”，因此，每个容器中接种的花药数量不宜太少，以形成一个合理的群体密度。 大麦：60枚/ml 小麦：20～40枚/ml （2）诱导培养基的选择 ①花药培养常用的基本培养基 MS 、Nitsch ：大多数双子叶植物 N6：禾谷类作物 B5：十字花科和豆科植物 C17：小麦、大麦和高粱 烟草和毛曼陀罗：仅含蔗糖的琼脂板 茄子花药培养中： MS＋2,4-D 0.5 mg/L＋KT 1mg/L n 93.8% 2n 6.2% MS＋2,4-D 2 mg/L ＋ KT 1mg/L n 64,1% 2n 35.9% ② 激素选择 烟草和油菜：2～3％诱导花粉胚； 水稻：3～6％诱导愈伤，分化时2～3％； 小麦：8～11％麦芽糖诱导愈伤，分化时5～8％蔗糖； 玉米：12～15％诱导愈伤； 甘蔗：高达20％。 ③ 蔗糖：一般为3％～15％ NO3-离子及NH4+离子的含量及比例对雄核发育有很大影响，降低培养基中铵态氮的浓度对培养有利； 一些有机N源，如谷氨酰胺、复合氨基酸可促进培养效果。 ④ 氮源 ⑤活性炭 烟草：1％活性炭可使花粉植株的产量提高1～2倍。 ⑥其它 琼脂糖、马铃薯提取液、水解乳蛋白、酵母提取物等可以提高诱导效果。 ①培养方式： 固体培养 半固体培养 液体培养 固－液双层培养 条件培养 （3）培养方式和培养条件 利用条件培养基进行的培养为条件培养。 “条件培养基”：预先培养过其它组织的液体培养基，以此培养基进行培养可以提高培养效率。 温度：大多数控制在25～28℃。 光照：诱导期间，以暗培养或散射光培养；分化阶段，一般在光下培养。 ② 培养条件 第七章 植物花药和花粉培养及单倍体育种 第一节 单倍体及单倍体育种 第二节 花药培养和花粉培养 一、单倍体的概念及其来源 1、概念 单倍体(haploid)：是指具有配子体染色体数（n）的孢子体(植物个体)。 单倍体有一元单倍体和多元单倍体。 第一节 单倍体及单倍体育种 南瓜的单倍体和二倍体的雄花和雌花 单倍体植物的特点： 体细胞染色体数减半； 生长发育弱，体形小、各器官明显减小； 雌、雄配子严重败育，有的不能进入有性世代。 2、单倍体