淇河鲫IL-8原核表达系统的构建及多克隆抗体的制备与-中国水产科学.PDFVIP

中国水产科学 2017 年9 月, 24(5): 970976 Journal of Fishery Sciences of China 研究论文 DOI: 10.3724/SP.J.1118.2017.16343 淇河鲫IL-8 原核表达系统的构建及多克隆抗体的制备与鉴定 1, 2 1 3, 4 2 3, 4 王俊丽 , 陈金顶, 卢荣华 , 雒燕婷 , 聂国兴 1. 华南农业大学 兽医学院, 广东 广州 510642; 2. 河南师范大学 生命科学学院, 河南 新乡 453007; 3. 河南师范大学 水产学院, 河南 新乡 453007; 4. 河南省水产动物养殖工程技术研究中心, 河南 新乡 453007 摘要: 为揭示淇河鲫(Carassius auratus var. Qihe) 白细胞介素-8(interleukin-8, IL-8) 的功能, 本研究构建了原核表达 系统, 并制备了兔抗鲫IL-8 多克隆抗体。首先采用RT-PCR 法扩增淇河鲫IL-8 基因编码序列中不含信号肽的基因 片段, 克隆到pET-32a(+)载体后转化入Rosetta 菌株构建原核表达系统。经IPTG 诱导表达出相对分子质量约27.8 kD 的 目标融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体, 效价达 1 ︰105 。经免疫亲和层析纯化的抗体能特异 性识别重组和天然的淇河鲫IL-8 蛋白。比较不同组织的免疫组化和荧光定量PCR 结果, IL-8 蛋白量和mRNA 的表 达量在不同组织间变化趋势一致, 在肌肉、脾和头肾均检测到较高的表达量, 肠道的表达量较低。本研究为进一步 探讨淇河鲫IL-8 的生物学功能奠定了基础。 关键词: 淇河鲫; 白细胞介素-8; 原核表达系统; 多克隆抗体; 组织表达; 免疫组化 中图分类号: S917 文献标志码: A 文章编号: 10058737(2017)05097007 白细胞介素-8(interleukin-8, IL-8/CXCL8)属 因的 DNA 疫苗一起注射, 可调节疫苗引起的早 于趋化因子CXC 亚家族, 由Yoshimra 等[1]于1987 期免疫反应中细胞因子的表达。因此, 深入开展 年首次从脂多糖刺激的人血单核细胞培养上清液 鱼类IL-8 功能的研究, 不仅可以揭示其在鱼类先 中获得。人类IL-8 是一种多细胞来源的小分子多 天性免疫反应中的作用机制, 还有望为鱼类传染 肽, 在炎症反应、免疫应答及创伤愈合等过程中 病的防治工作提供新的研究方向。淇河鲫(Carassius 具有重要作用[2], 也与肿瘤的发生、血管生成、转 auratus var. Qihe)为天然三倍体雌核发育鲫, 因原 移和复发等过程密切相关[3] 。除人类外, 很多哺乳 产于豫北的淇河而得名, 是河南省特有的鲫生态 动物、鸟类、两爬类及鱼类的IL-8 分子结构也已 类型[6] 。本课题组在前期的工作中阐明了淇河鲫 得到阐明。虽然对鱼类IL-8 功能的研究还不深入, IL-8 的基因和蛋白结构[7] 。成熟的淇河鲫IL-8 蛋 但现有资料显示其与人类和其他脊椎动物IL-8 一 白为76 个氨基酸残基组成的小分子多肽, 肽链的 样, 在免疫反应中发挥重要作用, 不仅可诱导头 N 端含有 4 个保守的半胱氨酸残基, 前两个半胱 肾和外周血白细胞的迁移, 还可刺激这些细胞的 氨酸由 1 个精氨酸分隔, 形成典型的CXC 结构。 增殖[4] 。另外, IL-8 有望成为鱼类DNA 疫苗的佐 在此基础上, 本研究采用基因工程技术构建了淇 剂。J