高效液相色谱法测定盐酸去甲乌药碱的有关物质.docVIP

精品论文 参考文献 高效液相色谱法测定盐酸去甲乌药碱的有关物质 姜春来 朱海杰 张武 关东 　　（珠海润都制药股份有限公司研发部 广东 珠海 519041） 　　【摘要】 采用CAPCELL PAK C18 MG (S-5) 4.6mmtimes;250mm色谱柱，UV检测器，检测波长：284nm，进样量：20mu;l，柱温：30℃；流动相A，0.05mol/L乙酸铵溶液（用冰醋酸调节pH至3.5），流动相B：乙腈，进行梯度洗脱。盐酸去甲乌药碱峰理论板数8487，与相邻杂质之间分离度5.57。最低定量限0.02%。重复性试验总杂质含量0.07%～0.09%。本方法快速、灵敏、并有良好的重现性，可用于盐酸去甲乌药碱有关物质测定。 　　【关键词】 盐酸去甲乌药碱；高效液相色谱法；有关物质 　　【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）28-0371-02 　　盐酸去甲乌药碱为新一代心脏负荷试验药物，其合成过程中产生的杂质会影响药品的质量和安全性，根据ICH[1]Q3A指南对盐酸去甲乌药碱中的杂质含量进行严格控制。本试验采用高效液相色谱法测定盐酸去甲乌药碱中的杂质，方法简便、结果准确可靠。 　　1.仪器试剂 　　Agilent 1260型高效液相色谱仪，UV检测器；配有色谱工作站处理系统。乙腈为HPLC级，乙酸铵、乙酸为分析纯，水为超纯水，盐酸去甲乌药碱为自制品。 　　2.实验部分 　　2.1 溶液制备 　　系统适用性溶液：取盐酸去甲乌药碱、杂质A、杂质B适量，加流动相A-流动相B（93:7）溶解并稀释成约含盐酸去甲乌药碱0.5mg/ml，杂质A0.5?g/ml，杂质B0.5?g/ml的溶液。 　　供试品溶液：取盐酸去甲乌药碱样品适量，加流动相A-流动相B（93:7）溶解并稀释成约0.5mg/ml的溶液。 　　对照溶液：精密量取供试品溶液1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相A-流动相B（93:7）稀释至刻度，摇匀。 　　2.2 色谱条件 　　色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（CAPCELL PAK C18 MG (S-5) 4.6times;250），流速：1.0mL/min；检测波长：284nm；进样量：20mu;l；柱温：30℃；流动相A：0.05mol/L乙酸铵溶液（用冰醋酸调节pH至3.5）；流动相B：乙腈； 　　梯度条件： 　　 　　2.3 专属性试验 　　取系统适用性溶液、供试品溶液分别进样。系统适用性溶液中盐酸去甲乌药碱主峰理论板数N=9835，盐酸去甲乌药碱峰与相邻杂质A峰之间的分离度R=4.7；供试品溶液中盐酸去甲乌药碱主峰理论板数N=7829，盐酸去甲乌药碱峰与相邻杂质A峰之间的分离度R=5.0。本方法具有良好的专属性。 　　 　　2.4 灵敏度试验 　　取对照溶液1.0ml，稀释50倍，得含盐酸去甲乌药碱0.1mu;g/ml的溶液。精密量取20?g进样，盐酸去甲乌药碱信噪比S/N=12.6，最低定量限为2.0ng。取对照溶液1.0ml，稀释150倍，得含盐酸去甲乌药碱0.07mu;g/ml的溶液。精密量取20?g进样，盐酸去甲乌药碱信噪比S/N=3.1，最低定量限为0.7ng。本方法灵敏度良好。 　　2.5 精密度试验 　　取盐酸去甲乌药碱（批号71613100101），分别制备6份供试品溶液和对照溶液。分别取供试品溶液和对照溶液各20?g进样，按外标法以峰面积计算供试品中杂质含量。结果表明本方法精密度良好。 　　 　　3.讨论 　　3.1 色谱柱的选择 　　盐酸去甲乌药碱及其含有杂质均为强极性化合物，CAPCELL PAK C18 MG (S-5)兼具硅胶填料优越分离性能和高分子填料高化学稳定性，对强极性化合物的分离具有很好的选择性。 　　3.2 流动性的选择 　　盐酸去甲乌药碱为生物碱类药物，于乙酸盐缓冲液中具有良好的稳定性。色谱分离效果更好，色谱峰理论板数和分离度均满足杂质测定需要。 　　【参考文献】 　　[1]IMPURITIES IN NEW DRUG SUBSTANCES Q3A(R1) dated 7 February 2002，INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONISATION OF TECHNICAL REQUIREMENTS FOR REGISTRATION OF PHARMACEUTICALS FOR HUMAN USE.