各类型胶原的分离方法精选.pdf

第 25 卷第 3 期 明　胶 　科 　学 　与 　技 　术 Vol . 25. No . 3 2005 年 9 月 The Science and Technology of Gelatin Sept . 2005. 　综述评论 　 各类型胶原的分离方法 郭 　云 北京奥弛坦登新技术公司 ,北京 ,100084 张景锡 北京科技大学材料学院 ,北京 ,100084 彭必先 中国科学院理化技术研究所 ,北京 ,100101 1 　 Ⅰ型胶原 1. 2 　从人胎盘提取[2 ] 1. 1 　从成年家兔提取[ 1] 取新鲜正常人胎盘 2 只 ,胎盘去脐带和羊 由耳静脉注入空气致死 ,迅速剥下兔皮 , 膜 、捣碎 、匀浆 ; 4 ℃下 胃蛋 白酶消化 20h ( 每 去毛及皮下脂肪 ,称重 ,然后将皮肤放入冰中 20g 湿重组织加入 0 . 05 % 胃蛋白酶 、0 . 5mol/ L (下述各步骤除特殊说明外 ,均在 4 ℃下进行) ) ( ) 醋酸 100mL ;清化上清液 酸性 中加入 NaCl 切碎 ,用绞肉机将其绞成肉泥状 ,置入烧杯中 , 至 1. 0mol/ L ,沉淀为胶原混合物 ; 随后在中性 ( 加入 2 . 5 倍量 的中性盐提取液 0 . 1M Tris , 条件下分别以 1. 5mol/ L 、2 . 5mol/ L NaCl 盐析 , 0 . 2M NaCl ,0 . 1mM EDTA ,p H 7 . 6) 。搅拌 2 ～ 反复数次分别得 Ⅰ型胶原和 Ⅲ型胶原的初纯 ( ) 3h 后 , 以 12 , 000 g g - 重力加速度 离 心 品;用 DE - 52 柱层析去除酸性大分子 ,得到 30min ,弃上清液 , 沉淀部分加入 2 . 5 倍量 的 纯化的 Ⅰ型胶原和 Ⅲ型胶原 。 ( ) [3 ] 3 %冰醋酸 HAc 溶液 , 抽 取搅 拌过 夜 ; 以 1. 3 　从人胚胎骨提取 20 ,000 g 离心 90min 。所得胶原经盐析沉淀 、 将脱钙骨粉浸入 0 . 5mol/ L HAc 24～48h , 低离子强度沉淀 、加热致凝胶化 、超速离心、三 取上清液缓慢加入研磨精细的 NaCl ( 终浓度 氯醋酸 - 乙醇沉淀 5 个步骤进行胶原纯化 。 为4mol/ L) ,搅拌过夜 。以35 ,000 g 离心20min ( ) Ⅰ型胶原的纯化 : 由于各型胶原可被不同 下同 , 去上清液 , 其沉淀物加入 0 . 5mol/ L 浓度 NaCl 所沉淀 , 将胶原溶液对 p H 7 . 3 , HAc 透 析 溶解 , 离 心 , 取 上 清 液 依 次加 入 0 . 1M Tris 缓冲液透析 ,更换透析液直至平衡 , 0 . 1mol/