微小RNA205通过靶向调控ZEB1抑制前列腺癌细胞迁移能力的研究.pdfVIP

５２８ 新医学２０１７年８月第４８卷第８期 ·基础研究论著 · 微小 ＲＮＡ２０５通过靶向调控ＺＥＢ１抑制前列腺癌 细胞迁移能力的研究 方少伟　叶永康　李牧　梁镇锋　卢世隆　吴永定　林卓远　罗正　韩兆冬 　　 【摘要】　目的　观察微小ＲＮＡ２０５（ｍｉＲ２０５）对前列腺癌细胞ＰＣ３迁移能力以及靶基因Ｅ盒结 合锌指蛋白１（ＺＥＢ１）表达的影响。方法　采用实时定量 ＰＣＲ检测各前列腺癌细胞株（ＰＣ３、ＬＮＣａＰ、 ＤＵ１４５）和良性前列腺上皮细胞（ＰｒＥＣ）中ｍｉＲ２０５的ｍＲＮＡ相对表达量，通过ｍｉＲ２０５模拟物（ｍｉＲ ２０５ｍｉｍｉｃｓ）、ｍｉＲ２０５抑制物（ｍｉＲ２０５ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）和相应的空载体分别转染前列腺癌细胞株 ＰＣ３后， 将ＰＣ３细胞分为过表达ｍｉＲ２０５组、ｍｉｍｉｃｓ对照组、抑制ｍｉＲ２０５组和ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ对照组４组，利用细 胞划痕试验和Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细胞侵袭试验检测各组细胞迁移和侵袭能力。采用蛋白免疫印迹法检测过表 达ｍｉＲ２０５组、ｍｉｍｉｃｓ对照组细胞ＺＥＢ１的蛋白表达水平，并通过荧光素酶报告试验验证ｍｉＲ２０５与 ＺＥＢ１基因的直接调控关系。利用蛋白免疫印迹法检测过表达ｍｉＲ２０５组、ｍｉｍｉｃｓ对照组细胞的上皮 钙黏素和波形蛋白表达水平。结果　前列腺癌细胞ＤＵ１４５、ＬＮＣａＰ和ＰＣ３的ｍｉＲ２０５ｍＲＮＡ相对表达 量均低于良性前列腺上皮细胞ＰｒＥＣ（Ｐ均＜００１）；ＰＣ３的ｍｉＲ２０５ｍＲＮＡ相对表达量最低，选为进 一步试验的细胞株。２４ｈ后，划痕试验显示过表达ｍｉＲ２０５组的迁移细胞数少于ｍｉｍｉｃｓ对照组，抑 制ｍｉＲ２０５组的迁移细胞数多于ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ对照组 （Ｐ均 ＜００１）；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细胞侵袭试验显示，过表 达ｍｉＲ２０５组侵袭细胞数少于ｍｉｍｉｃｓ对照组，抑制ｍｉＲ２０５组侵袭细胞数多于ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ对照组 （Ｐ均 ＜００１）。过表达ｍｉＲ２０５组ＰＣ３细胞的ＺＥＢ１蛋白表达水平低于ｍｉｍｉｃｓ对照组 （Ｐ＜００１）。过表达 ｍｉＲ２０５组中，携带野生型３非翻译区序列载体ＰＣ３细胞的荧光素酶活性值低于携带突变型３非翻 译区序列载体ＰＣ３细胞 （Ｐ＜００１）。与ｍｉｍｉｃｓ对照组相比，过表达ｍｉＲ２０５组的上皮钙黏素蛋白表 达水平降低、波形蛋白表达水平升高 （Ｐ均＜００５）。结论　ｍｉＲ２０５可能通过靶向降低ＺＥＢ１基因的 蛋白表达，抑制前列腺癌细胞的迁移能力。 　　 【关键词】　微小ＲＮＡ２０５；前列腺癌；细胞迁移；Ｅ盒结合锌指蛋白１；上皮间质转化 ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ２０５ｏｎｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｂｙｔａｒｇｅｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆＺＥＢ１　ＦａｎｇＳｈａｏｗｅｉ，ＹｅＹｏｎｇｋａｎｇ，ＬｉＭｕ，ＬｉａｎｇＺｈｅｎｆｅｎｇ，ＬｕＳｈｉｌｏｎｇ，ＷｕＹｏｎｇｄｉｎｇ，ＬｉｎＺｈｕｏｙｕａｎ， ＬｕｏＺｈｅｎｇ，ＨａｎＺｈａｏｄｏｎｇＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｒｏｌｏｇｙ，ＤｏｎｇｇｕａｎＰｅｏｐｌｅｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｄｏｎｇｇｕａｎ５２３０５９，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ＨａｎＺｈａｏｄｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｈａｎｚｈａｏｄｏｎｇ＠２１ｃｎｃｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ２０５（ｍｉＲ２０５）ｕｐｏｎｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙ ｏｆｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒＰＣ３ｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｔａｒｇｅｔｅｄｇｅｎｅｏｆＺｉｎｃｆｉｎｇｅｒＥｂｏｘｂｉｎｄｉｎｇｈｏｍｅｏｂｏｘ１ （ＺＥＢ１）Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｍｉＲ２０５ｍＲＮＡｉｎｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ（ＰＣ３，ＬＮ ＣａＰａｎｄＤＵ１４５）ａｎｄｂｅｎｉｇｎｐｒｏｓｔａｔｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ（ＰｒＥＣ）ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄａｎｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｃｏｍｐａｒｅｄＴｈｅ ｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒＰＣ３ｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈ