病毒感染的检查方法与防治.pptVIP

* 病毒感染的检查方法与防治原则 第25章 第一节 病毒感染的检查 病毒感染的检查 检测内容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） 二、病毒的分离与鉴定 一般程序： 标本 无菌处理 动物接种 鸡胚培养 细胞培养 指标阳性 指标阴性 病毒鉴定 盲传2～3代 指标阴性 病毒阴性 病毒的细胞培养 细胞培养瓶 单层细胞 1.细胞培养 (1)原代和次代细胞培养 组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 剪碎 培养基 (原代细胞) 单层细胞 (次代细胞) 传代培养 蛋白酶 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒 1.细胞培养 (1)原代和次代细胞培养 (2)二倍体细胞培养 体外分裂50～100代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。 特点：①对多种病毒敏感 ②不带异种蛋白(人源性) ③不带病毒，无致瘤潜能 ④可传50代左右 1.细胞培养 (3) 传代细胞培养 特点：①对多种病毒敏感性高 ②繁殖能力高，传代时间长 ③有致癌危险，不能用于疫苗生产 1.细胞培养 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔 流感病毒 腮腺炎病毒 绒毛尿囊膜 痘苗病毒 人类疱疹病毒 流感病毒的初次分离 嗜神经病毒 2.鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 2、鸡胚培养 优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂 3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒 1．病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； ②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； ③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （二）病毒的鉴定 ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 (1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE) 麻疹病毒感染细胞 呼吸道合胞病毒感染细胞 ②形成多核巨细胞或称融合细胞 (1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE) ③形成包涵体(inclusion body) (1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE) 腮腺炎病毒感染细胞 (2)红细胞吸附（hemadsorption） 病毒囊膜表面血凝素(HA) ＋ 红细胞表面HA受体 (3)干扰现象（interference） 风疹病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(－) 埃可病毒＋人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(＋) ＋ 人胚肾细胞 ＋ CPE(-)—风疹病毒(+) CPE(+)—风疹病毒(-) 风疹病毒？ 埃可病毒 (4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢 2.病毒形态学鉴定 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大 3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制试验） (2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA） ——多种病毒鉴定 (3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno- diffusion test) ——多种病毒鉴定 3.病毒血清学鉴定 4.病毒分子