免疫学实验二 ELISA(双抗夹心法)1PPT.pptVIP

实验二、酶联免疫吸附试验;　　酶联免疫吸附试验（ELISA）是将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合的一种敏感性很高的实验技术，可用于检测体液中微量的特异性抗体或抗原。首先，抗原、抗体的特异性反应在一种固相载体表面－聚苯乙烯微量反应板孔中进行，通过洗涤去除多余的游离反应物；然后加入酶标记的抗体或酶标记的抗抗体，从而形成抗体－抗原－酶标抗体复合物（双抗体夹心法）或抗原－抗体－抗抗体复合物（间接法）；此时加入酶底物和显色剂，在酶催化底物后，液体呈现显色反应。液体显色的强弱与复合物中待测抗原或抗体的量呈正比，借此可检测待测抗原或抗体的有无及含量。 　　该技术的特点是敏感性高，特异性强，操作简易，结果容易观察。;免疫酶技术是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。其原理是酶与抗体或抗原结合后既不改变抗体或抗原的特异性及免疫反应性，也不影响酶的催化效能。当存在相应酶底物时，酶能催化产生有颜色的产物，颜色的有无及深浅能反映相应的抗原或抗体是否存在及其量的多少。;ELISA的测定方法包括：;直接法;;材料和试剂：;操作步骤：;1.已知抗原包被酶标板;3.加样;加酶标记的抗HBsAb抗体：除空白对照外各孔50μl，充分混匀。将即时帖覆盖于反应板上，37℃孵育30min。 弃去反应孔内液体，拍干，用洗涤液注满各孔、静置30秒、再拍干，重复洗涤5 次。(操作同2) 显色：各孔（包括空白对照）加底物A液50μl（1滴），底物B液50μl（1滴），置37℃避光温育15min。 终止反应：各孔加终止液50μl （2mol/L H2SO4 ）。 比色：将反应板以酶标仪450nm处用空白孔调零，测各孔OD值。 ;6.显色;OPD（邻苯二胺）经酶作用后的显色反应;结果判断：;注意事项：;思考题：;THANKS;2009级医疗专科复习题;二、填空题（0.5×40=20分） 三、单项选择题（1×30=30分）;免疫的三大功能及其生理和病理表现。 影响抗原免疫原性的因素。 医学上有哪些重要的抗原。 简述Ig的基本结构。 免疫球蛋白有哪些主要的生物学功能？ 简述补体的组成。 补体活化三条途径的比较。 补体有哪些主要生物学功能？ 细胞因子有哪些共??的特性？ 细胞因子的主要生物学作用。 ;简述MHC分子的结构及其分布。 HLA的主要生物学功能。 T细胞表面有哪些与其功能相关的重要分子。 B细胞表面有哪些与其功能相关的重要分子。 巨噬细胞的主要生物学功能。 简述免疫应答的基本过程。 抗原的提呈途径（两条）。 固有免疫的组成及其与适应性免疫的关系。 两种人工免疫的主要区别。预防接种的注意事项。 灭活疫苗与减毒活疫苗的主要区别。;论述题（10×2=20）