植物组织培养技术-（二）.pptVIP

继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1－1.5cm时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养 2、愈伤组织的继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色 3、试管苗的培养 当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的见光培养 （五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 1、打开封口膜 2、清洗转移 用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间 （六）栽培 3、移栽 珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培 幼苗长壮后，移栽到土壤中 幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花 三、课题延伸 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季 课题2 月季的花药培养 一、课题目标： 说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径，说出影响花药培养的因素，学习花药培养的基本技术，尝试用月季或其他植物的花药进行培养。 二、课题重点和难点： 选取适宜的培养材料和培养基。 三、技能目标： 知道被子植物花粉发育的过程；说出产生花粉植株的两种途径；记住影响花药培养的因素，尝试花药培养的实验操作过程，并进行无菌操作；知道花药培养在育种上的意义。 一、自学导引： 1、基础知识 ------被子植物的花粉发育： （1）雄蕊由花丝和花药两部分组成。花药是雄蕊的主要部分，多数被子植物的花药由4个花粉囊组成，花粉囊外由囊壁包围，内生许多花粉粒。 当花粉囊的壁组织逐步发育分化时，会形成大量的花粉母细胞（小孢子母细胞）。 （2）花粉粒是由花粉母细胞经过减数分裂而形成，因此，花粉粒是单倍体的生殖细胞。花粉的发育要经历四分体时期、单核期和双核期等阶段。 实例一： 关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是 A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的 B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果 C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段 D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央 注：花粉母细胞经减数分裂形成4个单核花粉粒，每个花粉粒的细胞核进行一次有丝分裂形成1个花粉管细胞核和1个生殖细胞核，每个生殖细胞核再进行一次有丝分裂生成2个精子。 BD） 基础知识 ------产生花粉植株的两种途径 途径一：花粉通过胚状体阶段发育为植株； 途径二：花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。 人工种子是由外植体通过组织培养而获得的胚状体，然后加上人造胚乳，人造种皮而制成；外植体进行的是有丝分裂，无须通过两性生殖细胞结合而发育成的个体，属于无性生殖。 基础知识 ------影响花药培养的因素 1、主要的影响因素：材料的选择与培养基的组成。 （1）接种的花药时期：一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧时，花药培养成功率最高。选择完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒；花瓣松动，菌多，消毒困难。 （2）此外，亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度对诱导成功率都有一定的影响。 一、材料的选取 1、选择花药一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 2、确定花粉发育时期最常用方法：醋酸洋红法；焙花青－铬矾法。 注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，染色体容易被染色。通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。一般单核靠边期的花药培养成功率最高。 实验操作 二、材料的消毒 三、接种和培养 四、结果分析与评价 1、能够通过镜检找到处于适宜的发育期的花粉。用醋酸洋红法或焙花青－铬矾法检测单核靠边期的花粉粒。 2、花药出现污染的原因： （1）消毒不彻底；（2）接种室污染；（3）人为因素的交叉污染等。 3、略。 比较杂交育种、诱变育种、多倍体育种、单倍体育种 项目 杂交育种 诱变育种 多倍体育种 单倍体育种 处理 杂交 用射线、化学药品处理 用秋水仙素处理种子或幼苗 花药离体培养 原理 基因重组，把两亲本优良性状组合在同一后代中 用人工方法诱发基因突变，产生新性状和新品种 抑制细胞分裂中纺锤体的形成，使染色体数加倍后不形成两个细胞 诱导配子直接发育成植株，再用秋水仙素加倍成纯合体 优缺点 方法简便，但耗时长，需经多年才能获得纯合体 加速育种进程，大幅度改变某些性状，但有利个体不多 器官较大，营