[高一数学]pcr技术简介学生版.pptVIP

PCR原理简绍 PCR的扩增过程模拟体内DNA的天然复制过程，利用一种从水生栖热菌 Thermus Aquaticus （ Taq ）中分离出的具有热稳定性的DNA 聚合酶，及碱基互补配对原则。通过高温变性、低温退火和中温延伸三个阶段的多次循环,最终使基因扩增形成特异区段的DNA带，实现DNA在体外的特异性扩增。 PCR的操作步骤 PCR由变性--退火(复性）--延伸三个基本反应步骤构成 变性 ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃1min后，模板DNA双链即解离成为单链，以便之后引物结合，为下轮反应作准备 退火 ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至54℃ 45s，以便使引物与模板DNA单链的互补序列配对结合 延伸 ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，于72℃左右，以dNTP为反应原料，DNA序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链 实验室的实际操作 1.设计引物 2.PCR体系配置 3.PCR 4.产物的琼脂糖电泳检测 设计引物 此步骤实际为PCR整个过程中最为关键的一步。 目前一般采用计算机软件设计引物，之后交由生物技术公司对引物进行生产，常用的引物设计软件有Primer Premier5.0 一般的引物设计需要注意遵守的原则 （1）