桑国俊牛胚胎移植技术研究与应用演示幻灯片.pptVIP

牛胚胎移植技术研究与应用 ;主 要 内 容;一、胚胎移植技术基本概念;胚胎 有性繁殖的动物均有两个特殊的生殖细胞，即雄性生殖细胞（精子）和雌性生殖细胞（卵子）。精子和卵子在一定的条件下相遇，并互相融为一体，称为受精。受精卵通过细胞分裂从单细胞生命逐渐发育为多细胞的小生命，叫做囊胚。从单细胞期的受精卵到多细胞的囊胚期小生命叫做胚胎或者早期胚胎;早期胚发生过程简图; 胚胎移植 也称受精卵移植。是指将一头雌性动物（供体）的受精卵或早期胚胎移植到另一头雌性动物（受体）体内，使之继续发育为与供体动物具有相同基因型后代的技术过程 还可以表述为利用家畜超数排卵技术、同期发情技术、人工受精技术、胚胎采集、胚胎培养和鉴定技术，以借腹怀胎的形式快速纯繁和扩群优秀高产畜禽、频危和珍惜动物的一项新的家畜繁殖技术;胚胎移植的意义; 　　　　;二、胚胎移植技术的研究史;中国胚胎工程研究;甘肃省胚胎移植概况;三、胚胎移植技术要点;受体牛的选择标准 ;2.胚胎生产;常用超排处理方法 根据供体动物本身的血清激素水平的变化而设计，不同动物、不同个体和不同药物的处理方法不尽相同。牛通常在发情后第9—14天内进行处理 1 PMSG-HCG处理法 2 PGF2α-PMSG(FSH)处理法  3 FSH-LH-PGF2α处理法（最常用）;各国超排处理一览表;发情期激素水平和变化规律;比较典型的超数排卵日程安排;供体牛、羊的超排激素剂量 　　 减量注射;非手术采卵 牛非手术采卵目前已发展为一项成熟的实用技术。1973年日本的杉江首先试制成功了牛非手术采卵的专用设备即非手术采卵器(金属三套管)，后经过改进和简化，成为目前普遍采用聚氯乙烯制作的带有球囊的双通路导管 牛非手术采卵是一项技术性较强的操作过程，必须由经过严格培训的专业人员操作，在采卵过程中必须注意以下几点 1)供体牛的选择、管理和超排 2)采卵时间的确定(发情第7、8天) 3)采卵器具和冲卵液的准备(见附表) 4)冲卵前准备(保定、麻醉、清洗、灭菌和器具安装) 5)冲卵(冲卵液的灌流和胚胎回收) 6)冲卵后供体牛的处理(宫得康、PG) 7)检胚和受精卵的质量检查 注意点：熟练、无菌、保温;牛胚胎的基本发育阶段;冲胚示意图;26;27;28;;附表 牛非手术采卵用器具和药品试剂; 附表 PBS冲卵液的配方（g/l）;3 胚胎质量评价;1-cell;牛胚胎发育特征; 根据常规的形态学鉴别法可以把胚胎分为三级 A级(优良)胚胎轮廓清晰、颜色均匀、细胞密度良好、不见细胞外突和水泡等 B级(一般)胚胎轮廓清晰、颜色均匀、细胞密度良好、有突起细胞和水泡等，细胞变形率10-20% C级(较差)轮廓不清、颜色发黑、细胞数减少、外突细胞较多、变形率30-50% 通常鲜胚移植时，A级和B级胚均可采用，用于冷冻保存时，通常只选择A级胚，因为质量较差的胚胎抗冻性较差，因此不宜用于冷冻保存;4.胚 胎 保 存;常规的程序降冷冻方法 以1-1.5M的甘油、乙二醇等小分子量的渗透性低温保护剂对胚胎进行平衡，脱水，然后装入细管内，程序冷冻仪按1-2℃/min的速率降温，在-7℃左右进行植冰(自动或人工)，然后继续以0.3-0.6℃/min的速率降温至-25 ～－35℃投入液氮(-196℃)长期保存。目前采用在此法基础上建立的一步冷冻法 解冻 按照冷冻程序逆向解冻，一步法可象细管冻精一样直接解冻后应用;快速冷冻方法 采用2-4M的甘油或乙二醇和0.25－0.5M的蔗糖或乳糖为防冻剂，平衡0.5－30min即置于液氮蒸气中快速降温2min，然后投入液氮 解冻 按照冷冻程序逆向解冻 玻璃化冷冻方法 它是利用高浓度的混合防冻剂的骤冷时形成一种非冰晶体的玻璃化状态,使胚胎免受损伤的方法。这种方法只须将装有胚胎的细管从室温直接投入液氮即可（冷冻液① 10%EG；② 0.5mol/l蔗糖PBS液；③ EFS30液） 解冻 按照冷冻程序逆向解冻;牛胚胎的冷冻保存技术;液体配制; 5.受体牛的同步发情处理; 目前的处理方法 ①抑制卵泡发育(孕酮处理) ②抑制黄体形成(用前列腺素PGF2α处理) ③促卵泡成熟(用促性腺激素PMSG、hCG、 FSH和LH处理);同期发情处理方法 ; 6.胚胎移植; 胚胎的装管和装枪; 黄体的检查 ;影响牛胚胎移植妊娠率的因素;1 胚胎因素;2.受体因素; ;四、胚胎移植技术的应用及产业化;1、促进家畜的育种与改良;2.引进良种家畜的有效途径