植物检疫程序演示幻灯片.pptVIP

影响检验结果的因素： 种子表面的病菌孢子不一定能完全洗涤下来； 离心管内，悬浮液表面常形成一层极难沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子； 将悬浮液滴于玻片时，由于孢子迅速沉淀，造成一些视野间孢子分布极不均匀； 操作不够严格，造成人为误差。 原理：种子携带的真菌，无论外表黏附的还是潜伏种子内的，在种子萌发阶段即可开始侵染，甚至有些在种子还未萌发时就可长出病菌。 主要仪器及试剂：吸水纸、沙土、冰箱、培养箱等。 主要包括：保湿培养检验、沙土萌芽和试管幼苗症状测定法等三种方法，其中保湿培养检验法是国内外最常用的一种方法。 （四）、保湿萌芽检测 吸水纸法 适用对象：多种类型种传病害检验，尤其是真菌性病害的检验。已列为国际种子协会（ISTA）规定的种子健康检验的常规方法之一。 培养皿中放上浸湿的吸水纸三层 种子放于吸水纸上 置20-28 ℃温箱 近紫外光照射和黑暗交替处理， 3-7天 镜检、鉴定 观察判断：菌落形态、菌丝体颜色、疏密程度、生长特点、繁殖结构类型（如分生孢子梗的形状、长度及排列方式；分生孢子的形态、大小、颜色等及其在分生孢子梗上的排布） 吸水纸检验 ?存在问题 ：许多重要种传真菌用该法不能长出；腐生菌的迅速生长干扰实验结果。 适用对象 潜伏于种子、苗木、繁殖材料及植物产品内的病原菌，包括真菌和细菌。 ????????? 常用培养基 病原真菌—马铃薯蔗糖琼脂培养基（PDA）； 病原细菌—牛肉浸膏蛋白胨培养基。 还有选择性培养基，可抑制其它菌类的生长或病原菌的鉴定。 检验依据 病原菌形态学、生物学、生理生化特性等。 此方法对专性寄生的真菌、病毒、植原体等不适合。 （五）、分离培养检测 1、分离的方法 植物病原线虫的分离检验 直接检验 适用检验固着在植物体内或以休眠状态生存于植物组织内线虫，如粒瘿线虫（Anguina）、根结线虫（Meloidogune）、胞囊线虫（Heterodera）、水稻干尖线虫等。 首先以肉眼和手持放大镜仔细检查种子，检出畸形、变色、干秕种子及夹杂的杂质等，作进一步检查。 染色检验 适用于检验植物组织内的寄生线虫，用酸性品红乳酸酚溶液染色。 染色 （酸性品红乳酸酚溶液，加热至沸腾，加入植物材料，染色1-3分钟） 褪色 （乳酸酚溶液褪色） 观察 （线虫红色） 冷水冲洗 分离检验：有漏斗分离法、过筛检验法、漂浮分离法等。 i. 漏斗分离法：分离可活动的线虫。也称改良贝尔曼漏斗法。 ii. 过筛检验法：分离可活动的病原线虫。 iii. 漂浮分离法：分离土壤中马铃薯金线虫（Globodera rostochiensis）和各种胞囊线虫（Heterodera）的胞囊。???原理：干燥的胞囊比重较轻，可从水中漂浮出来。???方法：漂浮器分离法；三角瓶分离法。 漏斗分离法 过筛检验法 2、接种方法 （1）、拌种法：小麦矮星黑穗病 （2）、浸种法：种子浸入真菌孢子或细菌 悬浮液中 （3）、花器法：用于从花期侵入的病菌. 如小麦散黑穗病菌 （4）、喷雾接种 （5）、针刺接种：水稻细菌性条斑病 （6）、剪叶接种：水稻白叶枯 （7）、摩擦接种：“病毒可侵入，细胞不死亡” （六）、鉴别寄主检测 许多不同种类的病毒和一些细菌，接种到某些特定的敏感植物上可以产生特定的症状。 鉴别寄主：对特定病原物有特殊反应或表现特定症状的植物。 （七）、血清学检测 酶联免疫吸附测定法（ELISA） DNM-9602G酶标分析仪 DNM-9602 标配酶标分析仪 DNM-9602A酶标分析仪 几种酶标分析仪 （八）、显微镜检测 比较项 透射电镜 光学显微镜 镜头 电子透镜 光学镜头 光源 高速电子流 可见光源 承载体 铜网 载玻片 放大 电子放大 光学放大 球状病毒粒子 * 第三章 植物检疫程序 学习目标 重点掌握检疫的基本程序、检测方法及检疫处理方法。 植物检疫程序即检验检疫机构在执行检疫过程采取的方式和步骤，包括：检疫许可，检疫申报，现场检验和实验室检测，检疫处理和出证放行。 ?第一节 检疫许可 检疫许可：指在输入某些检疫物或引进禁止进境物时，输入单位向植物检疫机关提前提出申请，检疫机关经过审查做出是否批准引进的法定程序。 1．作用 （1）避免盲目引进，减少经济损失； （2）提出检疫要求，预防传入； （3）依据贸易合同，合理索赔。 ?2．引进的单位或个人应具备下述3方面的条件（1）必须事先向审批部门提出申请； （2）必须提供上级主管部门的证明，详细说明“待批物”的品名、品种、产地和引进的特殊需要和使用方式； （3）必须提供具有符合检疫要求的监督管理措施。 ?3．许可范围 （1） 输入的植