粪产碱杆菌多糖是一种β-葡聚糖.pptVIP

The selective Dectin-1 agonist,curdlan, induces an oxidativeburst response in chicken heterophils and peripheral blood mononuclear cells Dectin-1特异性兴奋剂粪产碱杆菌多糖可以明显增加鸡异噬性细胞和外周血单核细胞的氧化反应 实验证明了Dectin-1特异性兴奋剂粪产碱杆菌多糖可以明显增加鸡异噬性细胞和外周血单核细胞的氧化反应，鸡的异噬性细胞和血液外周单核细胞上有Dectin-1样受体。 本实验证明了，粪产碱杆菌多糖可以使鸡的异嗜性细胞和外周血细胞的活性氧（ROS）增加，即促进了 细胞的有氧代谢。如果先用海带多糖预处理这两种细胞，再用凝胶多糖刺激，ROS明显降低。所以，得出结论：鸡的异嗜性细胞和外周血细胞上有Dectin-1样的受体。 详细介绍 1、材料和方法： 1、1 来航鸡雏鸡（day old) 水和日粮自由采食 日粮营养均衡，不加药 1.2分离外周血异嗜性细胞和单核细胞 抗凝血：1%的甲基纤维素（methylcellulose） =1.5:1 ，2500r 15min 除去红细胞。取上清液和黄层置于不含钙离子和镁离子的Hanks’平衡的盐水里（HBSS）。此悬浮液被置于一个不连续的聚蔗糖-泛影葡胺梯度上（1.077的密度置于1.119的密度上）。然后，梯度离心2500r 60min。离心之后密度梯度1.077/1.119的界面上为PBMCs，1.119的密度层里为异噬性细胞。分离出的细胞用HBSS洗一次。配成1×107/ml，在使用之前可以储存在冰上。采用这种方法分离出的细胞纯度达到98％以上，95％以上可行 。 1.3处理细胞 设置四组：阴性对照组、阳性对照组（PMA组）、粪产碱杆菌多糖组、海带多糖组、海带多糖+粪产碱杆菌多糖组 分离出的异噬性细胞和PBMCs分装到2ml的离心管中，37℃条件下，用海带多糖预处理30min，并且用HBSS设置空白对照组。再加入粪产碱杆菌多糖，最终浓度100ug/ml（粪产碱杆菌多糖用0.03mol/L的NaOH溶解），空白对照组只加入相同浓度的NaOH作为消极控制因素（此处称作无刺激控制），细胞置于5.0ug/ml的佛甲肉豆蔻酸13-醋酸中孵育作为积极控制因素。37℃孵育45min，期间每15min测定一次活性氧簇产物。 1.4活性氧簇产物的检测 使用修饰过的氧化DCFH-DA荧光DCF检测。96微孔板，每孔150ul，在485nm和530nm光波下检测，记录结果。每15min一次，共测3次。 1.5 数据分析 结果和分析 异噬性细胞：45min后粪产碱杆菌多糖+海带多糖组活性氧簇产物有明显的降低，但是15min 30min后没有。也许更高浓度的海带多糖会产生更加明显的效果。 PBMCs：粪产碱杆菌多糖+海带多糖组在15min后活性氧簇产物明显降低，但是30min 45min后活性氧簇的产生并没有降低，可能是因为PBMCs自身抑制活性氧产物的产生。 又检测了粪产碱杆菌多糖对于PMA诱导的异噬性细胞和外周血单核细胞活性氧簇产物增加的影响，发现没有影响。证明了，海带多糖特异性的抑制凝胶多糖导致的活性氧产物增加。 3.结论：鸡的异嗜性细胞和外周血单核细胞上有Dectin-1样受体。 * * 在哺乳动物的细胞上，Dectin-1是针对β-葡聚糖的主要模式识别受体。将β-葡聚糖作为添加剂饲喂雏鸡，可以使雏鸡的天然免疫功能增强，提高吞噬细胞的吞噬能力和异嗜性细胞的杀菌能力。粪产碱杆菌多糖是一种β-葡聚糖，也是Dectin-1的特异性激活剂。海带多糖是一种β-葡聚糖受体的阻断剂，Dectin-1活性抑制剂。 实验思路 *