【2018年最新整理】原生质体融合育种.pptVIP

1.原生质体再生的影响因素（ｐ234） 菌体生理状态 稳定剂 酶浓度和作用时间 再生培养基组成 残存菌体的分离 ； 再生培养基上冷凝水 原生质体密度、再生方法 二、原生质体制备与再生　 ２．再生率及其计算 p236 目的：找出最佳的原生质体制备 和再生条件 再生频率（%）=[（C-B）/（A-B）] ×100% 三、原生质体融合 （一）原生质体融合过程 P236 （二）原生质体融合的影响因素 １、融合剂 ２、温度 ３、亲株的亲和力和原生质体的活性 ４、无机离子 （二）原生质体融合的影响因素 １、融合剂 化学融合剂：PEG 不同微生物适合不同相对分子质量的 PEG 真菌 4000-6000 细菌 1500-6000 物理融合剂：电场、激光 （二）原生质体融合的影响因素 １、融合剂 电场融合的优点： 适于动植物、微生物细胞；融合频率高 可在显微镜下观察 （二）原生质体融合的影响因素 １、融合剂 ２、温度 20~30℃ ３、亲株的亲和力和原生质体的活性 ４、无机离子 PEG介导融合 钙离子、镁离子 电场融合 糖或糖醇 四、融合体再生 复原： 再生培养基 细胞壁重建 形成菌落 P239 图9.8 四、融合体再生 （二）融合体的检出和分离 利用营养缺陷型标记选择融合体 利用抗药性 用灭活原生质体 利用荧光染色法 双亲对碳源利用不同 四、融合体再生 （二）融合体的检出和分离 1.利用营养缺陷型标记选择融合体 双亲原生质体的融合体形成菌落 亲本不能在基本培养基上生长 生产育种不常用，可用于遗传研究 （二）融合体的检出和分离 2.利用抗药性选择融合体 营养缺陷型和抗药性结合筛选P240 （二）融合体的检出和分离 3.用灭活原生质体检出融合体 灭活方法： 药物 紫外线 温度 （二）融合体的检出和分离 4.利用荧光染色法 亲本分别带上不同颜色荧光 融合后直接根据荧光颜色选出融合体 注意事项： 四、融合体再生 （二）融合体的检出和分离 观察形态 生化指标测定 DNA含量：分光光度计 五、融合重组体检出与遗传特性分析 （一）重组体的检出和鉴别方法 1、直接法 图9.9 2、间接选择法 图9.10 3、钝化选择法（灭活一方原生质体） 五、融合重组体检出与遗传特性分析 （二）融合率 见表9.2 五、融合重组体检出与遗传特性分析 （三）DNA含量及孢子形态测定 1、DNA含量测定 2、单倍化 3、酶活性及孢子体积测定 4、分子生物学方法 六、原生质体融合的应用 1、提高产量或质量，合成新物质 2、改良菌种遗传特性 3、优化菌种发酵特性 4、质粒转移 5、原生质体与细胞核融合 6、进行遗传分析 第三节 细菌原生质体融合育种 细菌细胞壁如何降解？P247 第三节 细菌原生质体融合育种 1.如何提高细菌原生质体制备率和再生率？ （1）预处理：目的改变细胞壁的性质 （2）溶菌酶： （3）细菌生理状态：对数期 （4）培养基和培养条件： 第三节 细菌原生质体融合育种 2.建立最佳融合体系 PEG 相对分子质量：4000~6000 浓 度：40%~50% 融合时间：30min 第三节 细菌原生质体融合育种 （三）操作方法 p251 斜面活化两代 液体振荡培养 * 第一节 微生物原生质体育种 原生质体： 1953年首次用巨大芽孢杆菌制备成功 1955年发现再生方法 微生物原生质体的特点： 对渗透压特别敏感 对诱变剂的诱变效应更敏感 失去对噬菌体的敏感性 不受感受态的影响 第一节 微生物原生质体育种 一、原生质体再生育种 二、 诱变育种 三、 转化育种 四、 融合育种 五、其他微生物原生质体育种 一、原生质体再生育种 ~： 微生物制备原生质体后直接再生， 从再生菌落中分离筛选变异株， 最终得到优良性状提高的正变菌株 原生质体再生育种正变率高于常规育种？ 制备和再生过程中相关因素 微生物组成和结构改变 一般选用对数期细胞制备原生质体 不需要加遗传标记 第一节 微生物原生质体育种 一、原生质体再生育种 出发菌株选择 菌种活化和预培养 原生质体制备 原生质体再生 高产菌株分离 二、原生质体诱变育种 微生物制备原生质体后诱变处理，分离到再生培养基中再生，从再生菌落中分离筛选高产正变菌株