【2018年最新整理】发酵工艺学讲稿.pptVIP

二、自然选育的方法 1. 单孢子悬浮液的制备 定量稀释后制成50～200个单细胞／ml的菌悬液 2. 分离及单菌落培养 根据计数结果，按丝状真菌、放线菌菌落大小不同，分离量以5～20个菌落／平皿为宜。 3．筛选 将分离培养后的各型单菌落，接斜面培养，成熟后接入发酵瓶，测定发酵单位的过程称为筛选。它分初筛、复筛两个过程。 初筛系指初步筛选，以多量筛选为原则。 复筛是对初筛得到的高产菌株的复试，以挑选出稳定高产菌株为原则。 初筛、复筛都要同时以生产菌株作对照。复筛选出的高单位菌株至少要比对照菌株产量提高5％以上，并经过菌落纯度、摇瓶单位波动情况，以及糖、氮代谢等的考察，合格后方可在生产罐上试验。复筛得到的高单位菌株应制成沙土管、冷冻管或液氮管进行保藏。 第二节 诱变育种 通过诱变剂处理就可以大大提高菌种的突变频率，扩大变异幅度，从中选出具有优良特性的变异菌株，这种方法就称为诱变育种。 诱变育种的特点：具有速度快、收效大、方 法简便 ；但是诱发突变缺 乏定向性、工作量大。 诱变育种工作主要包括出发菌株的选择、诱变处理和筛选突变株三个部分。 一、诱变剂的种类 1.物理诱变剂 紫外线、快中子、X射线、r-射线、激光 2.化学诱变剂 （1）碱基类似物：5-Bu （2）与碱基起反应的物质：亚硝酸、氮芥、 羟胺、硫酸二乙酯、NTG（N-甲基-N-硝基- N-硝基胍） （3）丫啶类 3.生物诱变剂：噬菌体 二、突变诱发过程 前突变 ：诱变剂所造成的DNA分子的某一位 置的结构改变称之。 前突变可以通过影响DNA复制而成为真正的突变，也可以经过修复重新回到原有的结构，即不发生突变。 （一)诱变剂接触DNA分子前 1.细胞对诱变剂的透性将影响诱变效果。 2.细胞质的某些组分和某些酶可和诱变剂相 互作用而影响诱变效果。 3.与基因所处的状态有关，而基因的状态又 和培养条件有关。 (二)DNA损伤的修复 微生物有五种方式来修复DNA损伤。 1．光复活作用 2．切补修复: 四种酶的作用：核酸内切酶 、核酸外 切酶 、DNA多聚酶 、DNA连接酶 3. 重组修复 ：又称为复制后修复 4．SOS修复系统 5．DNA多聚酶的校正作用：增变突变型 (三)从前突变到突变 校正差错 ：光复活作用、切补修复和DNA多聚 酶校正作用 引起差错 ：重组修复和SOS修复系统 一切影响这些修复系统中的酶活性的因素都能影响由前突变向突变转变这一过程 。 诱变前后的处理可影响诱变的效果 ： 1.通过影响与DNA修复作用有关的酶的活性而影响诱 变的效果； 2.通过使诱变的目的基因处于活化状态(复制或转录状 态)，使之更容易被诱变剂所作用，从而影响目的基 因的突变率。 (四)从突变到突变型 表型迟延 ：突变基因的出现并不等于突变表型的出 现，表型的改变落后于基因型改变的现 象。 1．分离性迟延 是经诱变处理后，细胞中的基因处于不纯的状态(野生型基因和突变型基因并存于同一细胞中)，突变型基因由于属于隐性基因而暂时得不到表达，需经过复制、分离，在细胞中处于纯的状态(一细胞中只有突变型基因，没有野生型基因)时，其性状才得以表达。 2．生理性迟延 突变基因由杂合状态变为纯合状态时，还不一定出现突变表型，新的表型必须等到原有基因的产物稀释到某一程度后才能表现出来。 三、诱变育种方案的设计 诱变育种包括三个环节：突变的诱发、突变株的筛选和突变高产基因的表现。 (一)制定筛选目标 (二)制定筛选方案 1．诱变过程 (1) 出发菌种的斜面 (2) 单孢子悬浮液制备 (3) 孢子计数 (4) 单菌落分离 2．筛选过程 (1) 传种斜面 (2) 留种保藏菌种 (3) 筛选高产菌株 四、突变的诱发 突变的诱发受到菌种的遗传特性、诱变剂、菌种的生理状态以及诱变处理时环境条件的影响。 1.出发出株的选择 （1）选择纯种 选择发酵产量稳定、波动范围小的菌株 （2）选择具有优良性状的出发菌株 选择的出发菌株应当具有我们所需要的代谢特性 （3）对诱变剂敏感 可以提高变异频率，而且高产突变株的出现率也大 （4）选择多个出发菌株 2.发酵工业的范畴 （1）微生物菌体发酵 （2）微生物酶