第五章_杂交与倍性育种课件.pptVIP

3、天然或人工未减数配子杂交 在通过花粉染色体加倍途径进行白杨三倍体育种时，即使采用比率较高的2n花粉杂交，三倍体的实际诱导得率也极低，难以获得可供选择的育种群体。这主要是因为白杨2n花粉较正常花粉萌发迟缓，在参与授精过程中竟争能力差的缘故。 为了降低单倍性花粉参与受精的竞争力，可采取纯化方法，提高2n花粉的比例，如使用600目金属网筛对混合花粉进行筛选等，但很难做到绝对纯化，尤其在比率较低时更难做到。 此时，利用花粉倍性对辐射敏感性（radiation sensitivity）差异，施加一定剂量的60Ｃo-γ射线辐射以刺激2n花粉萌发，同时抑制或杀死部分单倍性花粉，能够在一定程度上提高柱头上萌发和萌发较快的2n花粉比率，增进其参与授精的竟争力，从而大幅度提高三倍体诱导得率。 * 三倍体毛白杨诱导途径及其育种程序（康向阳，2002） * 4、胚乳培养与细胞融合 在大多数被子植物中，一个精核与两个极核融合完成双受精过程，从而产生三倍性的胚乳，因此通过某一树种的胚乳培养（endosperm culture）也可以获得三倍体植株。 1973年，Srivastava首次由罗氏核实木的成熟胚乳培养中获得了三倍体胚乳再生植株。此后胚乳培养研究进展迅速，林木胚乳培养主要集中在猕猴桃、枸杞、枣等经济树种，取得了三倍体苗木。 由于愈伤组织继代培养中往往会产生染色体变异，使再生植株多为非整倍体（aneuploid）、混倍体，甚至恢复为二倍体，是目前胚乳培养的主要问题。 * 4、胚乳培养与细胞融合 细胞融合（somatic cell fusion）能够获得同源或异源多倍体（alloploid）以及双二倍体（amphiploid），可以说是克服植物远缘杂交障碍、创造多倍体的又一条新途径。 1960年，Cocking发明了用酶去除植物细胞壁获得原生质体的方法,为植物细胞杂交奠定了基础。 此后，随着原生质体化学融合和电融合技术的发展，已有近百种种内、种间和属间原生质体融合获得了再生植株，甚至可以实现体配细胞融合与再生。 林木中的细胞融合主要集中于杨树等树种，有关研究仍处于实验室探讨阶段。 * 九、林木染色体加倍的方法 1、化学诱导染色体加倍 2、物理因素诱导染色体加倍 3、林木多倍体的鉴定 * 1、化学诱导染色体加倍 化学诱导法是指利用生物素等某些化学试剂处理分裂中的植物器官、组织甚至细胞，从而诱导细胞染色体加倍的方法。 细胞学观察表明，植物微管蛋白受秋水仙碱等化学物质处理后，形成纺锤丝，并使收缩机制受到抑制，造成正处于分裂阶段的细胞被阻止在中期而不能进入分裂后期，从而形成染色体数加倍的核。 染色体加倍时应根据育种目标选择适宜的处理材料。 如果是为了取得同源偶数倍性体，可选择萌动的种子、幼苗、茎尖、幼胚、合子、愈伤组织等，其中以合子、幼胚和刚萌动的种子最佳。其主要原因是这些材料包含的分裂细胞较少，不易出现嵌合体，容易见效。 如是为了取得奇数倍性体，则应处理进入减数分裂中的雌雄花芽，通过染色体加倍处理获得未减数配子，再与正常减数配子杂交选育多倍体。 * 1、化学诱导染色体加倍 染色体化学加倍除选用秋水仙碱外，萘嵌戊烷（C12H10）、有机杀菌剂富民隆、氧化亚氮（N2O）等也常被使用。 处理方式有： ①浸渍法：即用一定浓度的秋水仙碱等化学试剂浸渍萌发的种子、幼苗、茎尖、花芽等。 ②注射法：即用注射器将一定浓度的秋水仙碱等化学溶液直接注射到待处理的部位。一些树木的花芽适合用此方法。 ③涂布法：即将含一定浓度的秋水仙碱等化学溶液的羊毛脂软膏涂抹在生长点上。 ④喷雾法：即将配制好的秋水仙碱等化学药剂喷到要处理的分生部位。⑤药剂-培养基法：即将待处理材料接种到含一定浓度秋水仙碱等化学试剂的培养基上进行处理的方法。幼胚、愈伤组织以及一些较小的种子适合采用该种方法。 * 化学诱导染色体加倍过程中需重视的几个方面 （1）处理时期： 由于秋水仙碱等化学药剂只影响正在分裂的细胞，所以在处理时要了解被处理植物的细胞分裂周期，从而保证在细胞分裂有效作用时期之前进行处理。掌握最适处理时期，可取得事半功倍的效果。 据康向阳（1999）的研究，杨树花粉染色体加倍的最佳处理时期为减数分裂粗线期，此时施加0.5%秋水仙碱溶液处理，最高可以获得85%以上的2n花粉。 * 化学诱导染色体加倍过程中需重视的几个方面 （2）试剂的最适浓度： 因处理的材料、选择的处理方法以及处理的持续时间和环境温度等而异。 一般而言，敏感材料（如根）采取直接浸泡或注射、处理持续时间长、环境温度高时，浓度宜较低；而当材料相对不敏感、采取涂布、喷雾等方法、处理持续时间短或环境温度较低时，浓度宜较高。 秋水仙碱化学诱导采用的浓度一般为0.01%～0.5%，处理时间在12～72小时。 * 化学诱导染色体加倍过程