实验操作步骤整理.docxVIP

免疫组化1.切片常规脱蜡至水化：烧片80oC，1h；松节油I 20min，II 15min；100%乙醇I 8min，II 5min；95%乙醇I 5min，II 5min；75%乙醇 I 5min，II 5min；蒸馏水 5 min x3; PBS 5min x1.2.失活内源性过氧化物酶3% H2O2 37oC 20min; PBS 5min x3；甩干。3.抗原修复A 9ml+B 41ml+450ml 水（柠檬酸缓冲液）400ml（360水+40）或：Tris-EDTA 修复水浴98oC 15min；室温冷却；PBS 5min x3 甩干4.血清封闭37oC 30min；甩干，不洗。5.一抗（1:200稀释）4oC过夜（或室温2-3h），对照加PBS（稀释比例，来源）6.PBS 5min x4；二抗37oC 30min；PBS 5min x37.SABC染色SABC稀释100倍；990ul PBS +10ul SABC或三抗孵育 37oC 30min.8.DAB染色1ml 水中加1滴A摇匀，加1滴B和1滴C后摇匀，室温1-2min。水：双蒸水；A：浓缩缓冲液；B: DAB；C：H2O2现配现用，配好后遮光，30min内使用，剩余弃去。9.复染清水冲洗，浸于苏木素中1min清水冲洗，盐酸酒精（1ml HCl，100ml 95%酒精）几秒钟返蓝：清水冲洗10min。10.脱水75