LC-20A高效液相色谱仪使用注意事项及故障处理.pdf

一、 LC-20A 高效液相色谱仪功能和用途： 1、功能：本仪器采用高压梯度通过高压输液泵分别独立精确控制流量、调整溶剂 浓度比例，实现高效率、高精度混合；即配备了可提供全波长三维信息的二极管 阵列检测器，全新的光路设计与有效的梯形狭缝池设计保证了高分辨率和高灵敏 度；也配备了灵敏度更高、选择性更好的荧光检测器；还配备了具有高灵敏度、 检测范围更广的蒸发光检测器。 2 、用途：本仪器可以高效地分离分析高沸点、热不稳定的有机及生化试样；二极 管阵列检测器对大部分有机化合物有响应；荧光检测器可以检测产生荧光的物 质，对如多环芳烃、维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、 甾类化合物等有响应；蒸发光散射检测器对碳氢化合物、表面活性剂、聚合物、 脂肪酸和氨基酸、油和挥发性低于流动相的任何样品、不含发色团的化合物有响 应。 二、LC-20A 高效液相色谱仪使用注意事项 1、流动相必须用HPLC 级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质 (使用0.45um 或更细的膜过滤) 。 2 、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4 、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然 后 用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40 分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆 外部， 做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml 以上。 5、长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子， 而应该用有机相(如甲醇等) ，因为纯水易长霉。 6、每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7、C18 柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8、堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查 并 清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清 洗； ⑧用 10％稀硝酸清洗。 9、气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10、如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相 的 清洗。 11、要注意柱子的PH 值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12、更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的 流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 三、诊状可能的原因及解决方法 (1)保留时间变化 1、柱温变化 柱恒温，必要时需配置恒温箱 2 、等度与梯度间未能充分平衡 至少用10 倍柱体积的流动相平衡柱 3、缓冲液容量不够 用》25mmol/L 的缓冲液 4 、柱污染 每天冲洗柱 5、柱内条件变化 稳定进样条件,调节流动相 6、柱快达到寿命 采用保护柱 (2)保留时间缩短 1、流速增加 检查泵,重新设定流速 2 、样品超载 降低样品量 3、键合相流失 流动相PH 值保持在37.5 检查柱的方向 4 、流动相组成变化 防止流动相蒸发或沉淀 5、温度增加 柱恒温 (3)保留时间延长 1.流速下降 管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡 2.硅胶柱上活性点变化 用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱 3.键合相流失 同前(2)3 4.流动相组成变化 同前(2)4 5.温度降低 同前(2)5 (4) 出现肩峰或分* 1.样品体积过大 用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15% 2.样品溶剂过强 采用较弱的样品溶剂 3.柱塌陷或形成短路通道 更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件 4.柱内烧结不锈钢失效 更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 5.进样器损坏 更换进样器转子 (5)鬼峰 1.进样阀残余峰 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗 2.样品中未知物 处理样品 3.柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱) 4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱)