内分泌系统疾病动物模型的制备、原理及应用演示幻灯.pptx

内分泌系统疾病动物模型的制备、原理及应用;第一节 糖尿病动物模型 ;; 随着人口的老龄化和国民饮食结构的改变,我国糖尿病 (diabetes mellitus,DM )的发病率呈持续性上升趋势。人类的糖尿病是一个复杂的代谢性疾病,主要分为两个类型: 1型糖尿病: 易发生酮病,依赖于胰岛素; 2型糖尿病: 又称非胰岛素依赖型糖尿病(Non-insulin-dependent diabetes melitus,NIDDM),属非酮病型,人类糖尿病 90% 以上为此类糖尿病. ; 2型糖尿病及其并发症的迅速蔓延已经成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。而合适的糖尿病动物模型则是糖尿病研究的重要基础,糖尿病动物模型主要分为实验性糖尿病动物模型、自发性糖尿病动物模型、转基因糖尿病动物模型等。;一.实验性糖尿病动物模型; 1889年Minkowshi在手术切术大狗胰腺以后，首次制作出了多饮多食多尿及尿糖的糖尿病大狗。 袁晖等在1998年制作糖尿病犬模型时，手术切除大狗全部胰腺，在术后3d连续监测血糖，造模成功，血糖超过11．1mmol／L。 ; 2007年，Kurup等也切除了BALB／c小鼠的部分胰腺，同样诱导出类似2型糖尿病动物模型。但此种制作方法，不能够真实的模拟糖尿病血糖情况。;2 化学药物诱导法;1）四氧嘧啶法(Alloxan，ALX) 四氧嘧啶(2,4,5,6-嘧啶四酮)是嘧啶的一种含氧衍生物。在水溶液中以水合物形式存在。它最早由意大利化学家Luigi V. Brugnatelli在1818年分离。常用于糖尿病小鼠的造模。; 豚鼠具有抗药性。 四氧嘧啶引起的血糖反应分三个时相,开始血糖升高,持续约2ｈ,继而因β细胞残存的胰岛素释放引起低血糖约6ｈ,12ｈ后开始持久的高血糖。但利用此种方法造模会造成很严重的肝肾损伤，随着剂量增加，所引起的糖尿病越严重，与临床糖尿病发病机制不同。另外，部分采用四氧嘧啶制造的DM动物模型可自发缓解，故目前已经很少应用。 ;2）链脲佐菌素法(STZ); 纯的STZ为白色粉末状，在光照下易分解，因此需低温避光保存。STZ购买后应保存在-20℃。现配现用，用时应溶解在缓冲液中。溶解STZ的缓冲液有生理盐水、柠檬酸缓冲液等，通过不同溶剂溶解STZ后血糖模型的比较，最后指出pH4.5柠檬酸缓冲液可以作为理想的溶剂，因此推荐用柠檬酸缓冲液溶解STZ。; 新鲜配制的柠檬酸缓冲液溶解STZ溶液呈现透明的微黄色，如果颜色变深或者有气泡产生，说明该试剂的稳定性受到破坏，将导致STZ诱导的糖尿病模型失败。给药前，动物需要彻底空腹禁食，一般都是禁食12 h以上。 因STZ的水溶液不稳定，注射时要迅速最好在30 min内注射完，否则药效会降低。; ①直接破坏胰岛β细胞：主要见于注射大剂量STZ后；②通过诱导一氧化氮（NO）的合成，破坏胰岛β细胞； ③STZ激活自身免疫过程，进一步导致β细胞的损害：小剂量注射STZ可破坏少量胰岛β细胞，死亡的胰岛β细胞可作为抗原被巨噬细胞吞噬，产生TH1刺激因子，使TH1细胞系占优势而产生IL-2及IFN-γ，在胰岛局部促使炎性细胞浸润，并活化释放IL-1、TNF-α、IFN-γ、NO和H2O2等物质杀伤细胞。死亡细胞又可作为自身抗原，再次递呈给抗原递呈细胞进行处理，释放细胞因子,放大细胞损伤效应，最终诱发DM。; STZ特异性破坏胰岛β细胞，胰腺不能分泌胰岛素，使机体不能耐受糖分而出现糖尿病。此种情况与临床l型糖尿病发病相似；高热量饮食，再配合低剂量STZ，胰岛素作用于外周组织时作用减低，即可诱导出与2型糖尿病接近的动物模型。; 给猴、狗、大鼠和小鼠等注射链脲佐菌素后，血糖水平的改变也可分为三个时相：①早期高血糖相，持续约1~2小时，乃此药抑制胰岛释放所致；②低血糖相，持续约6~10小时，可能是由于胰岛β细胞破坏，大量胰岛素释放，是血糖显著降低；③24小时后出现稳定的高血糖相即糖尿病阶段，此时大部分胰岛β细胞已呈现不同程度的损伤和破坏。与四氧嘧啶糖尿病不同，链脲佐菌素引起的糖尿病高血糖反应及酮症均较缓和。;小鼠 小鼠对此药敏感性较差，需静脉注射100~200mg/kg方可引起糖尿病。 ;大鼠 于德民等采用腹腔内1次注射STZ（60mg/kg），建立了速发型链脲佐菌素Wistar大鼠糖尿病模型。采用每周1次连续3周腹腔内注射STZ (25mg/kg)，建立了迟发型Wistar大鼠糖尿病模型。; STZ诱导糖尿病时，存在剂量不同，制作的动物模型往往差异性很大。有一次腹腔给药45 mg/kg 、55mg/kg、65 mg/kg