[PPT制作技巧]细菌内毒素凝胶试验法.pptVIP

细菌内毒素凝胶试验法 一、试验程序 1、试验准备：试剂、仪器及用具等； 2、确定药品细菌内毒素限值（L）； 3、选择鲎试剂灵敏度（λ）； 4、计算供试品最大有效稀释倍数（MVD）和最低有效浓度（MVC）； 5、鲎试剂灵敏度复核； 6、药品与鲎试剂相溶性的初筛试验； 7、供试品干扰试验； 8、干扰试验的验证； 9、供试品日常的内毒素限量检查 二、实验仪器设备 1、分析天平 2、净化工作台 3、电热恒温干燥箱（0～300℃） 4、电热恒温水浴锅（37±1℃）或干式恒温培养器 5、温度计（100±1℃ ） 6、旋涡混合器 三、实验材料和器具 1、试管架 2、镊子 3、消毒棉球 4、称量瓶(30×60mm) 5、刻度吸管(1、2、5、10、15ml) 6、各种试管(10×75mm) 7、中号金属饭盒 8、加样器 三、实验材料和器具 9、移液器或刻度吸管与吸耳球 10、无热原吸头 11、酒精灯 12、打火机 13、剪刀 14、砂轮 15、封口膜 16、记号笔或标记纸 四、实验材料和器具处理 凡是与供试品或反应试剂接触的器具必须经除热原处理。 1、玻璃：饮用水清净控干 铬酸洗液浸泡4小时 饮用水洗净洗液 饮用水浸泡3次（每次30分钟） 纯化水冲洗三次 干燥 装入饭盒 250℃干烤至少1小时 自然冷却至室温 24小时内使用。 四、实验材料和器具处理 1、塑料：饮用水清净控干 纯化水冲洗三次 干燥 6%双氧水浸泡或环氧乙烷消毒 密封，备用。 但必须经过验证，必须无热原且不干扰细菌内毒素的检查。 五、试剂 1、鲎试剂（TAL）： 2、细菌内毒素国家标准品（RSE）： 3、细菌内毒素工作标准品（CSE）： 4、细菌内毒素检查用水（BET水）： 5、铬酸洗液： 6、75%酒精： 7、供试品： 六、鲎试剂灵敏度复核试验 （一）试验程序： 六、鲎试剂灵敏度复核试验 六、鲎试剂灵敏度复核试验 （二）试验操作基本程序： 1、试剂准备： 2、调节恒温水浴箱或培养器温度为37±1℃； 3、制备内毒素标准溶液2λ、λ、0.5λ、 0.25λ（0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml、0.03EU/ml）； 六、鲎试剂灵敏度复核试验 （1）取CSE一支，用砂轮在安瓿颈上部划痕，用75%酒精棉球擦拭后，折断； （2）用刻度吸管或移液器准确吸取BET水1.0ml加入CSE安瓿内，用封口膜封口，于旋涡混合器上混合15min，即制成20EU/ml的内毒素标准溶液； （3）再将内毒素标准溶液按20EU/ml→2.0EU/ml →1.0EU/ml→0.5EU/ml→0.25EU/ml→0.125EU/ml→0.06EU/ml→0.03EU/ml步骤进行稀释； 六、鲎试剂灵敏度复核试验 1）取试管架，将7支稀释管按2.0EU/ml、1.0EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml、0.03EU/ml的顺序编号排入试管架上； 2）用刻度吸管或移液器准确吸取3.6ml、3.0ml、 3.0ml、3.0ml、3.0ml、3.0ml、3.0mlBET水加入上述7支稀释管内； 3）另取一支刻度吸管或吸头，准确吸取0.8ml的20EU/ml内毒素标准溶液按，加入3.6mlBET水稀释管内，在旋涡混合器上混合30s，制成2.0EU/ml内毒素素标准液； 六、鲎试剂灵敏度复核试验 4）以后每步稀释需另一支刻度吸管或吸头，准确吸取3.0ml相应浓度的内毒素标准溶液加入相应的3.0mlBET水的稀释管中，在混合器上混合30s，同法依次制备成1.0EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml、0.03EU/ml的内毒素标准溶液。如下图所示。 六、鲎试剂灵敏度复核试验 六、鲎试剂灵敏度复核试验 4、细菌内毒素（TAL）的准备 （1）取TAL5支，用砂轮在安瓿颈部划痕，用75%的酒精棉球擦拭后，折断（避免玻璃屑落入安瓿内）； （2）用刻度吸管或移液器准确吸取BET水0.5ml沿瓶壁加入TAL的安瓿内，轻轻转动瓶壁使内容物全部溶解（避免产生气泡），将复溶后的TAL分别吸取移至一玻璃瓶内混合均匀； 六、鲎试剂灵敏度复核试验 （3）取试管架一个，按0.25EU/ml、0.125EU/ml、0.06EU/ml、0.03EU/ml、NC顺序做标记后，插入10×75mm反应试