克必隆零背景T载体-天恩泽.PDFVIP

隆 必 克 CAT#: 131233-20 低温运输 ，-20℃保存 列 系 克必隆零背景 T 载体 Zero Background T Vector 使用手册 V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路 26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦 506 网址： ；电话：400-6765278；电邮：order@ 产品及特点 本载体是经过独特改造的第二代 T 载体，用户只需在一个 PCR 引物上加上 几个特殊的碱基，即可零背景克隆和定向克隆，只有当 PCR 片段定向插入到本 载体时，菌落才能生长，其他所有情况（如载体自连、目标 PCR 片段的反向插 入、非目标 PCR 片段的正向和反向插入）下菌落均不能生长。原理如下： 本产品具有下列特点： 1. 零背景，阳性克隆率接近 100%。 2. 连接效率高，30 分钟可完成连接反应。 3. 简单，无需使用 IPTG/X-Gal 进行蓝白筛选。 4. 连接产物可直接用于细菌转化 。 5. 用途广，可用于 PCR 产物克隆、TA 克隆、克隆后的 DNA 测序、定向克隆。 6. 提供引物一对，可直接用于菌落 PCR 检测。 规格及成分 成分 编号 20 次包装 克必隆零背景 T 载体 ，（50 ng/μL） 131233A 20 μL 高效连接液 131233B 150 μL 引物 1 131233C 50 μL 引物 2 131233D 50 μL 使用手册 1 份 运输及保存 低温运输 ，-20℃保存，有效期一年。 自备试剂 DNA 片段等 使用方法 DNA 片段的克隆实验 1. 在微量离心管中配制下列溶液，总体积为 5 μL。 成分 用量 克必隆零背景 T 载体 1 μL DNA 片段 0.05 pmol～0.2 pmol dH O up to 5 μL 2 注：在进行克隆时，Vector DNA 和 Insert DNA 的摩尔比一般为 1：2～10。 PCR 片段扩增用的 2 条 Primer 除了含有扩增目的片段用的序列外，还要在 其 5’端均加入 TTTAA 5 个碱基。当进行定向克隆时，可以选择其中 1 条 Primer 的 5’端加入 TTTAA 5 个碱基。 2. 加入 5 μL （等量）的高效连接液。 3. 16℃反应 30 分钟。注：室温（