实验技术dna的琼脂糖凝胶电泳鉴定修改后sds-page.ppt

分子量Marker DNA (EcoRI Hind III) 100 bp Marker 1kb Marker DNA的琼脂糖凝胶电泳鉴定（P90） 实验三十 电泳： 是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象 正极 负极 带负电粒子 带正电粒子 实验原理 DNA的分子量 DNA的构象* 琼脂糖浓度 * 影响琼脂糖电泳迁移率的主要因素 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同的DNA，分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系 不同构像质粒 质粒的电泳 质粒DNA的3种形式泳动速度:超螺旋线性开环 质粒DNA的存在形式有3种: 1、共价闭环DNA:常以超螺旋形式存在 2、开环DNA:质粒DNA两条链中有一条发生一处或多处断裂，因此可以自由旋转从而消除张力,形成松弛的环状分子 3、线性DNA:因质粒DNA的两条链在同一处断裂而造成. 开环 超螺旋 线性 琼脂糖含（%） DNA片段的有效分离范围(kb) 0.3 5-60 0.5 1-30 0.6 1-20 0.7 0.8-12 1.0 0.5-10 1.2 0.4-6 1.5 0.2-4 2.0 0.1-3 分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度 操作步骤 琼脂糖凝胶的制备：溶化，冷却，核酸染料 凝胶板的制备：加梳子，倒胶 样品的制备：样品+1/5体积溴酚蓝 加样：加样端为负极（黑） 电泳：5V/cm 观察：紫外灯下观察，照相 主要实验器材 电泳仪 电泳槽 缓冲液 琼脂糖 凝胶槽 梳子 取液器 溴酚蓝 铺 胶 凝胶凝固后取出梳子 加缓冲液 准备样品 点 样 电 泳 注意观察溴酚蓝染液的迁移 紫外灯下观察电泳结果 凝胶成像系统 照 相