[自然科学]植科2-氨基酸.ppt

氨基酸碳原子编号 一般物理性质 赖氨酸（A）和谷氨酸（B）滴定曲线和等电点计算 氨基酸的化学反应是指它的α－羧基、α－氨基和侧链上的官能团参加的反应。 羧基的化学反应：成酯、酰氯、酰胺等。 与亚硝酸的反应 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 应用： 鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 ★首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 C.分离DNP-氨基酸 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目 二甲基氨基萘磺酰氯 (DNS-Cl，Dansyl chloride) 与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应 由Edman于1950年首先提出 为α- NH2的反应 用于N末端分析，又称Edman降解法 Edman反应；在弱碱条件下Aa与异硫氰酸苯酯（PITC）反应生成苯乙内酰硫脲衍生物，生成的衍生物可通过层析法分离鉴定，Edman首先用此反应鉴定多肽的N-端AA。 苯异硫氰酸酯法——氨基酸顺序分析法实际上也是一种N-端分析法。此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量 与甲醛的反应 * Amino acids can be readily detected and quantified by reaction with ninhydrin. As shown in Figure 4.10, ninhydrin, or triketohydrindene hydrate, is a strong oxidizing agent and causes the oxidative deamination of the -amino function. The products of the reaction are the resulting aldehyde, ammonia, carbon dioxide, and hydrindantin, a reduced derivative of ninhydrin. The ammonia produced in this way can react with the hydrindantin and another molecule of ninhydrin to yield a purple product (Ruhemann’s Purple) that can be quantified spectrophotometrically at 570 nm. The appearance of CO2 can also be monitored. Indeed, CO2 evolution is diagnostic of the presence of an -amino acid. -Imino acids, such as proline and hydroxyproline, give bright yellow ninhydrin products with absorption maxima at 440 nm, allowing these to be distinguished from the -amino acids. Because amino acids are one of the components of human skin secretions, the ninhydrin reaction was once used extensively by law enforcement and forensic personnel for fingerprint detection. (Fingerprints as old as 15 years can be successfully identified using the ninhydrin reaction.) More sensitive fluorescent reagents are now used routinely for this purpose. * * * *