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初始污染菌、 车间工作台面及工作服表面细菌总数、 生产工人手细菌总数 试验操作指导书 文件编号: XX/JG-002 版本：A 修改状态：0 受控状态： 发布日期： 实施日期： 编写: 校对: 核准: 1. 引用标准： GB15980-1995，GB7918.2，2010版药典 2. 技术指标： 一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包等非管道类、敷料：≤100cfu/g； 一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路等管道类：内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次； 车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数≤10cfu/cm2，生产工人手细菌总数≤300cfu/每只手。 3. 检测环境要求： 环境洁净度10000级下的局部洁净度100级单向流空气域内进行。 4. 测试数量及频率： 产品每批随机抽取10件； 车间工作台面（尤其是关键操作点）及工作服表面细菌总数、生产工人手细菌总数每周检测一次。 5 试验设备： 培养皿、镊子、5×5cm的灭菌规格板等采用干热灭菌205℃，4h；移液管、棉拭子、注射器等用牛皮纸包好，采用高压蒸汽灭菌，121℃，20min。 6. 试验试剂： 6.1 生理盐水：NaCl:8.5g + 蒸馏水：1000mL，溶解后，去分装到试管中，锥形瓶中，每瓶90mL,121℃,20min高压灭菌； 6.2 营养琼脂培养基制备：①溶化：按照说明书称取溶解培养基；②校正酸碱度：调节PH指到7.1-7.4；③灭菌：采用高压灭菌，121℃，30min。 7 试验步骤： 7.1 供试液的制备： 7.1.1 供试品是一次性使用引流袋，一次性使用透析护理包时，用无菌手续取样品10g，放入100mL灭菌生理盐水中，充分振荡后得到1：10的供试液； 7.1.2 供试品是一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路时，做内腔时，取10mL灭菌生理盐水，注入到产品中，得到的洗脱液即为供试液。取1mL供试液到9mL灭菌生理盐水中，即得1：10的供试液； 7.1.3 供试品是一次性使用静脉留置针，一次性使用内瘘针，血液净化装置的体外循环血路时，做外腔时； 7.1.4 供试品为工作台面或工作服表面时，将内径为5×5cm的灭菌规格板放在被检物体的表面，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次（往返为1次），将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水的采样管中，采平行样1～4个； 7.1.5 供试品为生产人员手时，取右手，被检手五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂10次后，将棉拭子放入10mL灭菌生理盐水的试管中，采平行样1～4个； 7.2 用灭菌吸管吸取1：10的供试液1mL2次，分别注入到两个培养皿中，另取1mL注入到9mL灭菌生理盐水中，使成1：100的稀释液，吸取1mL2次，分别注入到两个培养皿中，如样品含菌量高，还可继续稀释成1;1000等，每个稀释级的供试液取两个平行样。 7.3 将灭好菌的培养基冷却至45-50℃，倾注于4.2中加过样品的平皿内，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿内，作为空白对照，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，带琼脂凝固后，翻动平皿，至37℃培养箱中培养48h。 8. 菌落计数方法及报告方法: 8.1 先用肉眼观察，点数菌落数，再用5-10倍的放大镜检查，以防遗漏。 8.2 记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。 8.3 若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其他一半中的菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，以代表全皿菌落数。 8.4 选取平均菌落数在30-300之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘以其稀释倍数。 8.5 若有两个稀释度的平均菌落数均在30-300之间时，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数。 8.6 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 8.7 若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 8.8 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300个之间，且其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。 8.9 若所有稀释度均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。 8.10 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告，大于10