转座子插入引起的基因突变.docxVIP

转座子插入引起的基因突变一、原理转座子（Tn）是能在不同复制子之间转移位置的核苷酸顺序。它一般来自抗药性质粒，由一个或几个抗药性基因加上两端两个顺序相同（但是方向不一定相同）的核苷酸片段（称为插入顺序IS）构成。当一个转座子转移位置而插入某一基因时，能使这一基因失活，即发生突变。各个转座子的抗药性基因、转移频率、插入位置、插入顺序都可以不同。有些转座子对于染色体的各个位置插入没有偏向，而另一些则偏向于插入某些特定的位置。转座子的插入突变有两上表型效应，即基因突变的表型效应和由转座子带来的抗药性。因此利用转座子可以有效地取得任何一种突变型。一个很有效的方法是通过转座子诱发F’因子上的染色体基因的插入突变。大肠杆菌2－2菌株的染色体上携带有Tn5转座子（含kan抗性基因）。要使Tn5插入到F’ Lac+Pro+/Strs的乳糖发酵基因中去以引起Lac+突变，可先将这一F’因子转移到Δ(Lac Pro)Strr受体细胞中去，再观察是否发生了插入突变。在能排除供体的含链霉素的培养基上选择Pro+受体菌落，若是抗卡那霉素的，那就是说受体细菌不但接受了F’因子，而且这一F’因子带有Tn5，如果它又由Lac++变为Lac-,不能在以乳糖为唯一碳源的培养基上生长，那么，这一插入位置就是在乳糖发酵基因中。为进一步提高效率，还可以采取一种措施，使在特定条件下Lac+细菌不能生存而Lac-细菌能够生存。