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第四章 培养基灭菌 1.微生物的热死亡动力学 1.1 对数残留定律: 热灭菌＝微生物细胞内酶(蛋白)的变性失活 ＝蛋白质分子的分解和重排反应 ＝一级反应 所以，热灭菌过程遵循一级化学反应动力学方 程。 细菌芽孢的热杀灭动力学与营养细胞的有所不同。它表现为非对数的死亡动力学。这可能与孢子壁的化学成分及结构有关。但当温度超过120?C时，热阻极强的嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢的热杀灭动力学也接近对数死亡动力学即符合一级反应规律。 相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。 (2) K与灭菌温度的关系 微生物的热死灭动力学接近一级反应动力学，它的比热死灭速率常数K与灭菌温度T的关系可用阿累尼乌斯方程表征: lnK = lnA T ， K T , K , 结合对数残留定律, t 高温短时灭菌 T , K , 结合对数残留定律, t 低温长时灭菌 （四）灭菌对培养基中营养成分的影响 灭菌反应活化能对反应速率常数的影响 lnK = lnA 巴氏杀菌乳：72～75℃、15～20s 热处理。需冷藏保存，保质期在1-7天左右。可标识为“鲜牛奶／乳” 灭菌乳：超高温灭菌（Ultra High Temperature，简称UHT）通过瞬间（一般3-4秒）升高灭菌温度（135-150℃）来达到理想的灭菌效果。这种灭菌方式杀死了牛奶中绝大部分细菌，同时避免了对牛奶营养成分造成破坏。超高温灭菌奶一般可以常温保存，保质期可以达6-10个月，特别方便运输和储存。可标识为“纯牛奶／乳” 二、分批灭菌工艺的设计(实消) 实消流程 放罐-----清洗-----检修-----空消-----进料-----预热-----实消-----冷却-----接种发酵 优点 （1）设备成本低； （2）染菌风险低——连续灭菌过程需要将灭 菌发酵液无菌输送至无菌发酵罐中； （3）易于人工控制； （4）易于处理含高比例固体物质的培养基。 缺点 （1）对培养基的营养成份破坏大； （2）蒸汽用量波动大。 灭菌曲线 分批灭菌时间＝加热时间＋维持时间＋冷却时间 对枯草芽孢杆菌FS5230的芽孢 E＝317984 J/mol， A＝7.94×1038 min－1，R＝8.28 J/(mol·K)。 则枯草芽孢杆菌FS5230的芽孢在高温下的K值计算式： K＝ 121℃时枯草芽孢杆菌FS5230的芽孢的K值是3.67 min－1。 12字：“能进则进，不进则出，活汽灭菌” 进汽口（液面以下）：无菌空气口、排料口、取样口、 洗视镜口 排汽口：接种口、消泡剂口、补料口、压力表考克、 物料管口等 升温阶段，尽量从所有管口向罐内进汽，待压力升后， 液面下的管进汽，液面上的管出汽。保证活汽灭菌。 记时时间：从温度上升至规定温度后开始。 3 连续灭菌(连消) 优点 （1）能够实现高温短时灭菌，能极大地保持培养基 的营养； （2）易于放大； （3）易于自动化控制； （4）减少蒸汽用量； （5）降低蒸汽量的波动； （6）在一定程度上可减缓发酵罐腐蚀。 缺点 （1）设备成本高； （2）染菌风险高； （3）不适合处理含高比例固体物质的培养基。 连消灭菌时间＝维持时间 Bye-bye 3.3.3理想流动: 平推流(活塞流Piston) :所有物料粒子在反应器中的停留时间是相同的 全混流:反应器各处的浓度相同,并且等于出口物料的浓度, 各物料因子在反应器内具有一定的停留时间分布. 3.3.4非理想流动: 凡流动状况偏离平推流和全混流的流动均为非理想流动 3.4连续灭菌器中流体的流动模型 3.4.1活塞流模型 3.4.2全混流模型 3.4.3多级全混流釜模型: 3.4.4扩散模型 3.4.1 活塞流模型（PF：piston flow） 特点：物料径向流速度一致，即所有的物料具有相同的停留时间。 反器类型：长径比大