适宜技术应对结核感染教材教学课件.pptVIP

结核病分子生物学诊断 溶解曲线法 比例法药敏 敏感度 特异度 阳 性 预测值% 阴 性 预测值% 总符 合率% 敏 感 耐 药 % % INH 敏 感 110 4 90.5 98.2 95.5 96.6 96.1 耐 药 2 38 RFP 敏 感 103 2 95.8 97.2 94.1 98.1 96.8 耐 药 3 46 收集我院样本库的临床分离菌株154例，进行了溶解曲线法耐药基因突变分析以及罗氏比例法药敏试验，总符合率在96%以上。并对耐药结果不相符的11株菌进行了基因测序分析，均证实有耐药基因突变。 结核病分子生物学诊断 二、结核分枝杆菌RNA检测(TB-RNA) RNA作为临床分子诊断靶标的优点： RNA 拷贝数≥ DNA拷贝数 更具临床意义: 生命力旺盛的病原体RNA转录活跃 RNA远不如DNA稳定，病原体死亡，RNA很快降解 1.交叉污染少 2.较好的愈后指标 结核病分子生物学诊断 统计今年我院住院患者179例，分析涂片、培养和TB-RNA检测报告，结果如下： 患者类型 例数 TB-RNA 阳性例数 阳性率 涂片阳性 27 23 85.2% 涂片阴性 142 41 28.9% 培养阳性 68 62 91.1% 培养阴性 111 2 1.8% 我院涂片、培养阳性率分别为：15.1%和37.9%；TB-RNA的总阳性率为35.8%。 结核病分子生物学诊断 三、EasyNAT TB-DNA检测（恒温扩增法） 原理：将病原体DNA扩增、核酸杂交和核酸试纸条检测三种技术有机地融为一体，在恒温扩增反应中加入两对TB特异性引物、一对特异性探针，同时 一次性完成TB DNA的扩增及杂交 过程，然后用一次性核酸检测装 置进行定性诊断。 检测目标片段:目标为结核分枝杆菌 特异性IS6110片段。 结核病分子生物学诊断 操作步骤 结核病分子生物学诊断 2015年6月，我科参加CTCTC“EasyNAT?结核分枝杆菌核酸检测试剂盒现场应用评估”项目,结果如下： 患者类型 例数 EasyNAT TB-DNA检测 阳性率 % 阳性 阴性 涂片阳性 7 7 0 100.0 涂片阴性 43 2 41 4.7 培养阳性 10 9 1* 90.0 培养阴性 40 0 40 0.0 注*：1例培养阳性最终鉴定为非结核分枝杆菌 结核病分子生物学诊断 四、Gen-Xpert MTB/RIF 进行标本处理、实时PCR和利福平耐药性检测的完整平台 痰标本可以直接放入模块中，而无需与任何试剂进行混合处理 GeneXpert 设备可进行标本液化、去污染、富集、DNA提取、 rpoB实时扩增、应用分子灯塔检测耐药相关的突变 容易使用，不需要进行分子生物学培训 操作完全自动化， 使用起来既容易又安全。 结核病分子生物学诊断 Xpert MTB/RIF与PCR TB-DNA检测的比较： 阳性符合率＝99.03％，阴性符合率＝92.61％，总符合率＝95.31％ Gen-Xpert PCR TB-DNA 合计 阳性 阴性 阳 性 204 21 225 阴 性 2 263 265 合 计 206 284 490 结核病分子生物学诊断 涂片阳性肺结核: Xpert 检出率=99.35％ 涂片阴性肺结核: Xpert 检出率=35.32％ Gen-Xpert 涂片结果 合计 阳性 阴性 阳 性 152 71 223 阴 性 1 130 131 合 计 153 201 354 结核病分子生物学诊断 Xpert MTB/RIF与BD960液体培养比较实验： 阳性符合率＝95.52％，阴性符合率＝95.51％，总符合率= 95.51％ Gen-Xpert 培养+鉴定结果 合计 阳性 阴性 阳性 213 12 225 阴性 10 255 265 合计 223 267 490 结核病分子生物学诊断 Xpert MTB/RIF与比例法药敏比较实验： 阳性符合率 ＝96.88％，阴性符合率 ＝95.53％，总符合率 ＝95.73％， Gen-Xpert 利福平药敏试验 合计 耐药（阳性） 敏感（阴性） 耐药（阳性） 31 8 39 不确定 0 2 2 敏感（阴性） 1 171 172 合计 32 179 211 结核病分子生物学诊断 WHO关于Xpert MTB/RIF的建议 Xpert MTB/RIF 应该用于MDR-TB的高危人群、以便尽早发现MDR-TB患者，有效控制疫情。 Xpert MTB/RIF 在MDR或HIV问题不十分严重的地区，可以考虑作为显微镜检查基础之上的后续检测，特别是用于涂阴标本的进一步检测。 1. 结核病背景资料 2. 结核病病原学实验室