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病理学进展 浙江中医药大学附属一院 倪桂宝 病理学概念:病理学是研究疾病病因、发病机制、形态结构改变以及由此而引起的功能变化的一门基础医学与临床医学之间的桥梁学科。基础病理学、实验病理学和临床病理学（诊断病理学），自1858年Virchow发表了细胞病理学以来，病理学经历了大体器官病理学、细胞病理学、超微病理学、免疫病理学、分子病理学的发展阶段。 诊断病理学： 是利用组织（各种活体标本），细胞、尸体解剖等通过多种方法对全身各系统疾病进行最后诊断的一门重要学科。 18世纪Morgagni(1682-1771)- 尸体解剖 1843年Virchopw-显微镜-细胞病理学 1932年Knpall和Rusha –透射电镜 1938年Ardepnne-扫描电镜 18世纪50年代柏林大学Carl Ruge提出将活体组织检查作为外科手术的一种必要的诊断方法 1953Watscn和Crick发现DNA双螺旋结构及DNA-RNA-蛋白质的化学序列 1980年-免疫组织化学 2000年分子病理学诊断 任务 提出明确的病理诊断 提供可能的病因学证据或线索 提供有关治疗和预后因素的判断。 病理学诊断和研究方法及新技术 1.大体观察 2.石蜡切片 3.冰冻切片 4.组织化学 5.光学显微镜观察 6.荧光显微镜 7.电子显微镜观察 8.激光共聚焦显微镜观察 9.免疫组织化学 10.癌基因 11.分子病理学： ⑴滤膜杂交:从组织中提取的DNA固定在由硝酸纤维素或尼龙构成的滤膜上，直接做班点印迹或杂交。 原位杂交：是应用标记的互补核酸序列或探针检测组织切片或细胞样本中特定的DNA或RNA序列。 ⑵核酸分子杂交 ⑶重组DNA、DNA测序 ⑷PCR:聚合酶链反应 ⑸荧光原位杂交（FISH） ⑹显色原位杂交（CISH） 12.细胞遗传学:染色体检测 13.流式细胞术 14.图像分析技术 15.免疫荧光 一、免疫组织化学的概念 免疫组化技术是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异抗体上的显示剂（如酶、金属离子、同体位素等）显示一定颜色，并借助光学显微镜、荧光显微镜、电子显微镜观察，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新技术。免疫组化国外从1974年开展以来，1981年HSU发明了ABC法，被国内一些科研机构应有，1988年逐渐应用到临床病理。90年代已广泛应用于科研、临床病理诊断、鉴别诊断，以确定其组织来源，判断预后及治疗效果等。 抗原和抗体 抗原 (antigen) 全抗原(complete antigen) 半抗原(hapten) 抗体(antibody) 多克隆抗体(polyclonal antibody) 纯化的抗原直接免疫动物（大多数为兔），并从该动物血中获得的免疫血清。是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物 特异性不如单克隆抗体好，有时会造成抗体的交叉反应，但能广泛用于石蜡包埋组织切片。 单克隆抗体(monoclonal antibody) 单克隆抗体是针对一种抗原决定簇的一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体。 大多数为小鼠。其优点为特异性强、抗体产量高。单克隆抗体只针对抗原分子的某一个抗原决定簇，这一抗原决定簇可以是抗原分子上的无关抗原决定簇，在免疫组织化学中广泛用于冰冻切片和石蜡切片。 抗原与抗体的关系 抗原： 引起机体产生免疫反应 决定免疫反应的特异性 产生抗体、致敏淋巴细胞等物质 利用抗体可以检测抗原物质 抗原与抗体的反应 免疫反应 血清学反应 抗原与抗体的结合是高度特异性的结合，在一定的条件下可以解离。 一个抗体分子有两个抗原结合点（称两价） 一个抗原的分子上则可有许多个结合点（称为多价）。 （ 3）抗原与抗体分子的结合，不受两者数量比例的限制，但如需要出现肉眼可见的反应，则抗原与抗体的量需保持一定比例。在抗原或抗体过量的条件下，不能聚合成大颗粒，因此不能出现肉眼可见的反应。（BIGBEE现象） 免疫组织化学的应用范围及优点： 应用范围： 提高病理诊断准确性 对疾病的预后和治疗的意义 癌基因蛋白的检测 对肿瘤增生程度的评价 微小病灶的发现 : 微小癌，微小病灶（如羊水栓塞） 在肿瘤分期上的意义 指导肿瘤的治疗 免疫性疾病的辅助诊断 病原微生物的检测 2、优点 （1）特异性强：抗体与抗原“一对一”。 （2）敏感性高：抗体可稀释几十倍，甚至上千倍、上万倍在组织、细胞中与抗原结合。 （3）定位准确，形态与功能相结合：可在组织、细胞中进行抗原准确定位，因而可以同时对抗原在同一组织或细胞中进行观察。 免疫组织化学技术 组织标本的取材和