细胞与遗传试验.PPT

细胞与遗传实验 实验室要求 点名签到 穿白大衣 损坏公物要赔偿 保持实验室整洁干净、每次实验毕安排值日生 细胞与遗传实验课程要求 每班根据实验需要分组，以组的形式完成细胞与遗传系统性实验 每次实验后，每人写实验报告1份（提交） 系统性实验结束后，每人写实验小结—细胞、遗传各1份（提交） 当逢课外加时，望能安排时间并请谅解 认真参与实验（思考、总结、提问和建议） 实验（一）细胞损伤与保护1 活细胞观察 细胞传代培养 细胞计数 细胞培养 取活体动物组织，在体外，无菌条件下，模拟体内环境（营养、温度、pH值、气体等），对其进行培养，使细胞能够生存、生长、保持原来生物学特性的一种实验方法。 实验目的 通过对活细胞的培养 1、掌握细胞培养的基本操作及技术要领。为进一步试验，打好基础。 2、为后续实验，提供必需的试验材料。 细胞培养内容 细胞原代培养 细胞换液、细胞传代培养 细胞形态观察、活率测定 细胞计数 细胞生长曲线、分裂指数 细胞冻存与复苏 等等 实验室基本条件 无菌环境 仪器设备 普通器材 一般试剂 无菌环境 无菌室 无菌操作 无菌操作 洗手 着装 近火焰操作 试剂瓶等斜放 back 器 材 试 剂 活细胞观察 体外培养的、生长中的细胞，借助显微镜来进行察看、比较、判断，以求对细胞做出进一步处理。 器材 倒置显微镜 培养细胞株 方 法 肉眼观察 显微镜下观察 肉眼观察 培养液清浊度 培养液颜色 显微镜下观察 细胞的密度 细胞的透明度 细胞的形状 光学显微镜（10倍）下活细胞形态 光学显微镜（40倍）下活细胞形态 光学显微镜（10倍）下活细胞形态 细胞传代培养  细胞在支持物表面长满后，进行重新分配，再培养的过程。 器材与试剂： 超净工作台 二氧化碳培养箱 倒置显微镜 细胞株（CHL） 滴管、培养瓶、瓶塞等 培养液：DMEM （ 含10%小牛血清） 消化液：0.25%胰蛋白酶液 操 作（无菌） 细胞株——弃原培养液——加 胰旦白酶液（消化细胞）——弃胰旦白酶液 ——定量加入培养液1ml，冲打细胞成悬液——取1滴细胞悬液细胞计数——按需接种至新培养瓶（皿） ——补足新鲜培养液——37℃培养 细胞传代消化法示意图 注 意 胰蛋白酶消化时间要严格掌握 ( 温度、pH) 细胞计数 细胞的传代、冻存、生化研究及生长曲线制作等，都需对细胞进行计数。细胞的多少对实验结果会有影响。 器 材 细胞株 血球计数板 普通光学显微镜 试 剂 0.25%胰蛋白酶液 培养液 操 作 　单层细胞——胰蛋白酶液消化细胞 ——定量（1ml）加入培养液—— 轻轻吹打细胞（单细胞悬液）—— 计数细胞 　 计算公式 细胞数/毫升 ＝ （４大格细胞数÷4 ） × 10000×稀释倍数 1ml＝1000mm3 注 意 细胞悬液要充分打匀 正确使用计数板 悬液渗入计数室时，不易过多（溢出）、过少（气泡） 数细胞有压线时，数左不数右、数上不数下 正确使用显微镜（电源、亮度、倍数、聚光器等） 小 结 活细胞观察（培养细胞瓶、皿或板 放在倒置显微镜载物台上）—— 进入无菌室——细胞传代培养 （1传2）——取1滴（或数滴）细胞悬液 ——显微镜下细胞计数 告 知 实验（二） 细胞活率测定（MTT） 亚细胞结构分离及鉴定（离心） 细胞超微结构检测（电镜） 告知 一、9月16日-实验前2天中午饭后，细胞传代接种： 小盖片培养瓶3瓶（1组） ， 96孔板9孔（8组） ， 25ml培养瓶8瓶（ 4组） 二、9月17日-次日中午饭前，细胞换液（ 损伤） 1、3瓶含小盖片培养瓶（电镜） 2瓶正常、4瓶损伤 2、每组96孔板9孔（活率） 3孔正常、6孔损伤 三、9月17日-下午课后5点，细胞换液（损伤恢复） 4瓶损伤小盖片中2瓶、 6孔损伤中3孔 四、下午1:30继续实验 显微镜下细胞消化前后示意图 back 细胞计数示意