第二章基因操作的主要技术原理-3.ppt

第五节 基因的化学合成 化学合成法优缺点 优点：准确性极高，合成速度较快 缺点：合成的寡核苷酸链长度短(不大于80个碱基) 一般用于PCR引物、寡核苷酸探针、人工接头、较小基因的合成。 对于超过该法合成范围的寡核苷酸链的合成，可采用分段合成法。 生物化学法 即在体外以目的DNA片段为模扳，利用酶学反应(Klenow酶或Taq酶)，在特异引物的引导下，合成特异的DNA片段。 目前最常用的方法是PCR法。 生物化学法优缺点 优点：合成基因效率高、速度快、特异性好。随着PCR技术的发展，现在已能合成长达几十kb的DNA片段。 缺点：产物中可能有1／l0000-l／1000的错配率，也就是说，PCR产物中可能存在突变体，因此，通过PCR克隆的基因，必须通过DNA序列测定才能确认。 目的基因的获取 1. 化学合成法 　　已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。 2.基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 　 　 基因突变技术是通过在基因水平上对其编码的蛋白质分子进行改造，在其表达后用来研究蛋白质结构功能的一种方法。 根据其特点，可将基因突变分为两大类：位点特异性突变和随机突变。 位点特异性突变又可大体分为三种类型：一类