CN107354130-CN201710067351-一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107354130 A (43)申请公布日 2017.11.17 (21)申请号 201710067351.8 C12N 5/0735(2010.01) (22)申请日 2017.02.06 (71)申请人 广州市妇女儿童医疗中心(广州市 妇幼保健院、广州市儿童医院、广州 市妇婴医院) 地址 510623 广东省广州市天河区金穗路9 号 (72)发明人 吴韶清　欧志英　金宇林　李发涛　 唐婕　吴洁莹　陈劲松　谢闺娥　 陆琰　梁绮华　刘东　 (74)专利代理机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 44205 代理人 许飞 (51)Int.Cl. C12N 5/0775(2010.01) 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 (54)发明名称 一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法 (57)摘要 本发明公开了一种人胎盘绒毛膜间充质干 细胞分离方法，包括：1)取健康人胎盘绒毛膜组 织，剪成条块状，用生理盐水充分冲洗；2)加入适 量生理盐水，用匀浆器将绒毛膜切碎为细小颗 粒，用生理盐水冲洗至澄清；3)再次用匀浆器处 理至微小颗粒后，离心去除上层血细胞；4)沉淀 中加入酶进行消化，离心分离沉淀；5)用生理盐 水离心洗涤两次后，沉淀中加入培养基接种培 养；6)第7天弃除组织块和培养液，用生理盐水冲 洗培养瓶底后，加入新鲜培养基，之后每3天更换 培养基至细胞融合度达80-90%，用胰酶消化传 代，即得人胎盘绒毛膜间充质干细胞。本发明操 A 作简便快捷，可获得高质量的人胎盘绒毛膜间充 0 质干细胞。 3 1 4 5 3 7 0 1 N C CN 107354130 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，包括如下步骤： 1）取人胎盘绒毛膜组织，剪成1-3cm条块状，用生理盐水充分冲洗，并称量绒毛膜湿重； 2）用手持式电动匀浆器处理绒毛膜至细小颗粒，再次用生理盐水冲洗至澄清； 3）再次用匀浆器处理至微小颗粒后，离心去除上层血细胞； 4）沉淀中加入同体积的胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ，于37℃消化； 5）用生理盐水离心洗涤两次后，沉淀中加入培养基，置于37℃、5%CO培养箱中培养； 2 6）第7天弃除组织块和培养液，用生理盐水冲洗培养瓶底后，加入新鲜培养基，之后每3 天更换培养基至细胞融合度达80-90%，用胰酶消化传代，即得人胎盘绒毛膜间充质干细胞。 2.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：人胎 盘绒毛膜组织取自产后6小时内，无老化钙化、无传染性疾病的胎盘，并用生理盐水充分冲 洗绒毛膜组织上的血液。 3.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：人胎 盘绒毛膜组织厚度为0.3～0.5cm。 4.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：人胎 盘绒毛膜组织为整个胎盘的绒毛膜组织。 5.根据权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法，其特征在于：细小 3 颗粒的大小为0.1～0.3cm 。