CN107428817-CN201680014597-纯化白蛋白融合蛋白的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107428817 A (43)申请公布日 2017.12.01 (21)申请号 201680014597.2 (74)专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公 司 72001 (22)申请日 2016.03.11 代理人 梁谋　罗文锋 (30)优先权数据 (51)Int.Cl. 62/132198 2015.03.12 US C07K 14/765(2006.01) (85)PCT国际申请进入国家阶段日 C07K 1/14(2006.01) 2017.09.08 C07K 1/16(2006.01) (86)PCT国际申请的申请数据 C07K 1/18(2006.01) PCT/US2016/022003 2016.03.11 C07K 1/22(2006.01) C07K 1/36(2006.01) (87)PCT国际申请的公布数据 WO2016/145307 EN 2016.09.15 (71)申请人 免疫医疗有限责任公司 地址 美国马里兰州 (72)发明人 T.帕布斯特　M.丰塞卡　C.汤普森　 A.亨特　王向阳　铁柳　Y.李　 权利要求书9页 说明书62页 序列表133页 附图14页 (54)发明名称 纯化白蛋白融合蛋白的方法 (57)摘要 本发明涉及纯化白蛋白融合蛋白以降低敏 感的氨基酸残基的氧化水平的方法。该方法包括 亲和基质层析步骤和阴离子交换层析步骤。这些 经纯化的白蛋白融合蛋白具有低水平的氧化并 且保留其增强的体内半衰期及其生物活性。在一 些实施例中，该白蛋白融合蛋白包含支架，如人 类肌腱蛋白C支架。进一步披露了包含该白蛋白 融合蛋白的组合物。 A 7 1 8 8 2 4 7 0 1 N C CN 107428817 A 权　利　要　求　书 1/9页 1.一种在纯化期间减少白蛋白融合蛋白中色氨酸和/或甲硫氨酸氧化的方法，该方法 包括使包含该白蛋白融合蛋白的组合物经受以下纯化过程： (a)亲和基质； (b)阴离子交换基质， 其中通过应用包含辛酸盐的洗脱缓冲液将该白蛋白融合蛋白从该亲和基质上洗脱。 2.如权利要求1所述的方法，其中该洗脱缓冲液包含约2mM至约100mM的辛酸盐。 3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中用包含以下项的洗涤缓冲液洗涤亲和基 质： (1)约2％至约20％的多元醇，其中该多元醇选自下组，该组由以下各项组成：1,2-丙二 醇、1,3-丙二醇、1,2-丁二醇、1,3-丁二醇、1,4-丁二醇、