CN107227337-CN201710393866-微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能的方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107227337 A (43)申请公布日 2017.10.03 (21)申请号 201710393866.7 (22)申请日 2017.05.28 (71)申请人 桂林理工大学 地址 541004 广西壮族自治区桂林市七星 区建干路12号 (72)发明人 王秀丽　沈阳阳　陈钰梅　覃玉莲　 李子院　陈南春　 (51)Int.Cl. C12Q 1/18(2006.01) 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 (54)发明名称 微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗 菌性能的方法 (57)摘要 本发明公开了一种微孔板法测定P型红辉沸 石分子筛抗菌剂抗菌性能的方法。该方法运用酶 标仪以OD值作为评价指标，用微孔板法测定红辉 沸石分子筛抗菌剂的抗菌性能。以大肠杆菌、金 黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌为指示菌，测定P 型红辉沸石分子筛抗菌剂对三种菌的最低抑菌 浓度和最小杀菌浓度；并测定浓度为6 96mg/mLP ~ 型红辉沸石分子筛抗菌剂对上述三种细菌的生 长曲线的影响，通过与试管梯度稀释法的比较， 微孔板法同样适用于此测定，并且用量少、检测 快速。 A 7 3 3 7 2 2 7 0 1 N C CN 107227337 A 权　利　要　求　书 1/1 页 1.一种微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能的方法，其特征在于具体步 骤为： (1)称取P型红辉沸石分子筛抗菌剂敞开置于超净工作台紫外灭菌，然后加入到无菌液 体培养基中，分别配制成浓度为6mg/mL、12mg/mL、24mg/mL、48mg/mL、96mg/mL的梯度浓度抗 菌剂； (2)在96微孔板中，取1个微孔作为空白对照孔，加入200µL无菌液体培养基；取1个微孔 作为菌液对照孔，加入200 µL待测菌培养液；其余每排微孔作为梯度浓度抗菌剂测定孔，向 其中加入200μL步骤(1)配制的梯度浓度抗菌剂，每个浓度加3个微孔，然后再加入10µL待测 菌培养液，用封口膜封口，在37℃下以220 r/min的转速振荡培养18 h后观察各个微孔的浊 度； (3)分析步骤(2)的观察结果，澄清的微孔表示无细菌生长，浑浊的微孔则表示有细菌 生长，以无细菌生长的最小浓度作为P型红辉沸石分子筛抗菌剂的最小抑菌浓度；依次取无 细菌生长的各微孔培养物100 µL，涂布于固体培养基上，37℃下培养18h，平板上菌落数小 于5个的最大浓度即为P型红辉沸石分子筛抗菌剂的最小杀菌浓度； (4)分别取50mL步骤(1)配制的梯度浓度抗菌剂，每个浓度取3份，并加入100μL已活化 的待测菌，同时增加一组空白，然后均置于37℃下以220 r/min的转速振荡培养48h，期间每 2 h取菌液200μL，装入96微孔板中，利用酶标仪在630 nm处测定OD值，根据测得数据绘制抗 菌剂对待测菌的生长曲线图，即实现微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能； 所述待测菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌中的一种。 2 2 CN 107227337 A 说　明　书 1/3 页 微孔板法测定P型红辉沸石分子筛抗菌剂抗菌性能的方法 技术领域 [