放线菌发酵制药-2011年6月23日.ppt

学习情境三放线菌发酵制药 子学习情境3.1  四环素发酵 任务一 发 酵 准 备 一、发酵罐的清洗 1、发酵罐的结构 不锈钢搅拌罐主要有不锈钢壳体、夹套、搅拌装置、通风及空气分布管、挡板、接种孔、多个点击插孔、多个流加孔以及各个相关管道的连接口组成。 2、发酵罐的清洗 从接种孔加入70L左右的清水，启动搅拌，转速为100r/min左右，用蒸汽加热清水至121℃左右，搅拌30min左右，以此清洗发酵罐。清洗完毕，利用空气压力排出洗水，并用空气吹干发酵罐。 二、发酵设备检查 检查项目： 管路连接 阀门 密闭性 仪表校正 三、发酵设备灭菌 1、消毒与灭菌在发酵工业中的应用 消毒：指用物理和化学方法杀死物料、容器、器具内外的病原微生物。一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢。 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢。消灭杂菌和防止杂菌污染。 2、灭菌方法： 干热灭菌、湿热灭菌、物理灭菌（射线、微波等）、化学灭菌（各种化学药品）； 干热灭菌法 灼烧灭菌、在电热或红外线在设备内加热 主要用于保持干燥的物料、器具等 湿热灭菌法 借助蒸汽释放的热使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。 优点：1）蒸汽来源容易，操作费用低廉，本身无毒 2)蒸汽具有很强的穿透力，灭菌彻底 3）蒸汽输送可借助本身的压强，调节方便，技术管理容易 缺点：1)设备费用高 2）不能用于怕受潮的物料灭菌 射线灭菌 紫外线 化学药品灭菌法 表面消毒剂 高锰酸钾溶液：0.1～0.25%、漂白粉 、75％的酒精、新洁尔灭和杜灭芬、甲醛 37％、戊二醛、过氧乙酸、焦碳酸二乙酯、酚类 3、发酵罐灭菌（空消） 灭菌压力：0.147—0.18MPa，45—60min。 注意事项： 空消后，先用无菌空气保压，灭菌的培养基、相关物料输入罐内后，打开冷却系统进行冷却。 4、附属设备的灭菌 分空气过滤器：发酵罐灭菌之前灭菌，灭菌后空气吹干备用。 补料系统： 补料管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。 消沫剂系统：蒸汽压力0.15MPa，保温30分钟。 消沫剂管路：与补料罐同时灭菌，保温时间1小时。 移种管路：蒸汽压力0.30—0.45MPa，保温时间1小时。 任务二 种子制备 一、培养基配制 1、孢子培养基（g/L） 小麦麸皮 35 琼脂 20 MgSO4 0.1 KH2PO4 0.2 (NH4)2HPO4 0.3 蒸馏水 pH自然 2、种子培养基（g/L） 黄豆饼粉 20 淀粉 40 酵母粉 5 蛋白胨 5 MgSO4 0.25 KH2PO4 0.2 (NH4)2SO4 3 CaCO3 4 3、发酵培养基（g/L） 黄豆饼粉 40 淀粉 100 酵母粉 2.5 蛋白胨 15 MgSO4 0.25 CaCO3 4 (NH4)2SO4 3 a-淀粉酶（105U/mL） 0.1mL 二、培养基灭菌 1、分批灭菌 将配制好的培养基输入发酵罐内，直接用蒸汽加热，达到灭菌要求的温度和压力后维持一定的时间，再冷却至发酵要求的温度，称为分批发酵或实罐灭菌。 培养基的预热 培养基先加热到80－90℃，然后再导入蒸汽升温到120－180℃。 目的：1）防止直接导入蒸汽时由于培养基与蒸汽的温度过大而产生大量的冷凝水使培养基稀释 2）防止直接导入蒸汽所造成的泡沫急剧上升而引起的物料外溢。 培养基灭菌 从各路通入蒸汽（进气口、排料口、取样口），温度升到120－130℃，保温30min 分批灭菌的注意事项 各路蒸汽进口要畅通，防止短路逆流；罐内液体翻动要剧烈，以使罐内物料达到均一的灭菌温度。 排气量不宜过大，以节约蒸汽。