生化反应-中国试剂网.PDF

中国试剂网 3.10.2.22 细菌的生理、生化试验简介 微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别 一些在形态和其它方面不易区别的微生物。因此微生物生化反应是微生物分类鉴 定中的重要依据之一,微生物检验中常用的生化反应介绍如下： 一、糖酵解试验 不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用 者，或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。 试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体 培养基管中，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。接种后，置 36±1.0°C 培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡， 微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无 微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力，培养物可呈弥散生长。本 试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴 别，因而每次试验，常需同时接种多管。一般常用的指示剂为酚红、溴甲酚紫， 溴百里蓝和 An-drade 指示剂。 二、淀粉水解试验 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解 后，遇碘不再变蓝色。 试验方法：以 18~24h 的纯培养物，涂布接种于淀粉琼脂斜面或平板（一个 平板可分区接种，试验数种培养物）或直接移种于淀粉肉汤中，于 36±1°C 培养 24~48h ，或于 20 ℃培养 5 天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面，若为液体培 养物，则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果，阳性反应（淀粉被分解）为琼 脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明环、或肉汤颜色无变化。阴 性反应则无透明环或肉汤呈深蓝色。 淀粉水解系逐步进行的过程，因而试验结果与菌种产生淀粉酶的能力、培养 时间，培养基含有淀粉量和 pH 等均有一定关系。培养基 pH 必须为中性或微酸 中国试剂网 3.10.2.22 性，以 pH7.2 最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱，因而以临用时制备为妥。 三：V-P 试验 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩 合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二 乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V －P （+ ）反应。 试验方法： １）O’Meara 氏法：将试验菌接种于通用培养基，于 36±1°C 培养 48h ，培 养液 1ml 加 O’Meara 试剂（加有 0.3%肌酸 Creatine 或肌酸酐 Creatinine 的 40% 氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管 1~2min，静置于室温或 36±1°C 恒温箱，若 4h 内不呈现伊红，即判定为阴性。亦有主张在48~50°C 水浴放置 2h 后判定结果者。 ２）Barritt 氏法：将试验菌接种于通用培养基，于 36±1°C 培养 4 天、培养 液 2.5ml 先加入 a 萘酚（2-na-phthol ）纯酒精溶液 0.6ml,再加 40%氢氧化钾水溶 液 0.2ml，摇动2~5min ，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或 36±1°C 恒温箱，如 2h 内仍不显现红色、可判定为阴性。 ３）快速法：将 0.5%肌酸溶液 2 滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁 琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入 5%α-萘酚 3 滴，40%氢氧化 钠水溶液 2 滴，振动后放置 5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。 本试验一般用于肠杆菌科各菌属的鉴别。在用于芽胞杆菌和葡萄球菌等其它 细菌时，通用培养基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生，故应省去或以氯化钠 代替。 四：甲基红（Methyl Red ）试验 中国试剂网 3.10.2.22 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步 分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性 产物，可使培养基