(精编)【医学英文课件】 聚合酶链式反应 Polymerase chain reaction (PCR)教学课件.pptVIP

聚合酶链式反应Polymerase chain reaction （PCR）;;PCR目的;Polymerase chain reaction (PCR) 是由 K. Mullis 于1983发明的, 这项技术通过模拟DNA的复制过程，在体外大量扩增目的DNA片段。 PCR 技术使我们可以无限制地扩增我们研究的DNA 片段，特别是哪些不容易得到的目的DNA片段。;PCR的基本反应步骤;五要素:;PCR反应体系;PCR仪;引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。 理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 实际上，有讲究！;设计引物应遵循以下原则;引物3‘端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。选择G/C为最佳。 引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。（常用！） 引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。 引物量： 每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。;如何设计引物？;Primer3;Primer3 参