②液滴逆流色谱.ppt

或用PC法求β值，选择理想分离条件。 纸色谱（PC）也叫纸分配色谱（PPC， Paper Partition Chromatography）。 2.1 影响分离的因素 ② pH值 对于酸性、碱性、两性化合物，pH值可改变它们的存在状态（游离型和解离型），分配比受pH值的影响，因为 ②液滴逆流色谱(DCCC): 一种液-液分配色谱，流动相呈液滴形式垂直上升或下降，通过固定相的液柱，实现物质的逆流色谱分离。 特点：不易乳化，样品可定量回收，分离效果好，特别适合于分离皂苷等水溶性成分。 缺点：样品处理量小。 ③高速逆流色谱（HSCCC） 通过特定的高速行星式旋转所产生的离心力场 作用，使无载体支持的固定相稳定地保留在蛇形管 内，并使流动相单向、低速通过固定相，实现连续 逆流萃取分离物质的目的。 用于各种物质的分离，包括蛋白、酶、三萜、生 物碱、皂苷等。 三、沉淀法 1、酸碱沉淀法：利用某些成分在酸中或碱中溶解，又在碱中或酸中沉淀的性质达到分离。对酸性、碱性或两性有机化合物来说，通常通过加入酸、碱以调节溶液的pH，以改变分子的存在状态（游离型或解离型），从而改变溶解度而实现分离。如：酸提碱沉法，碱提酸沉法等 2、试剂沉淀法：在天然产物的提取液中，加入某些试剂，使与有效成分结合而产生沉淀，借此进行分离。该方法与简单萃取法相配合即析出被另一相不相混溶的有机溶剂。 3、铅盐沉淀法：利用有效成分或杂质能与铅离子形成难溶性盐，从而使有效成分与杂质分开，本方法可用来沉淀杂质，也可用来沉淀有效成分。例如鞣质的提取分离。酸性或碱性化合物还可通过加入某种沉淀试剂使之生成水不溶性的盐类沉淀等析出。如加入铅盐、雷氏铵盐等 四、吸附法： 分两种情况，一种是吸附杂质，另一种是吸附有效成分。常用吸附剂有，氧化铝、氧化镁、酸性白土、活性炭等。从活性炭上洗脱被吸附的物质时，溶剂的极性越小，洗脱能力越强。 五、盐析法： 在提取液中，加入无机盐，使其达到一定浓度或饱和，促使有效成分在水中溶解度降低，而沉淀析出，使有效成分与其他水溶性较大的杂质分离。 六、透析法： 透析法是膜过滤法中的一种。 （1）原理：透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜、而大分子物质不能透过半透膜的性质，以达到分离的目的，本质上是一种分子筛作用。 （2）应用：对于生物大分子，一般可以通过透析法进行浓缩和精制。如药用酶的精制。 分离和纯化皂苷、蛋白质、多肽、多糖等大分子物质，可将其留在半透膜内，而将如无机盐、单糖、双糖等小分子的物质透过半透膜，进入膜外的溶液中，而加以分离精制。 七、升华法 也可以用于提取。 八、分馏法：根据物质的沸点进行分离 1．概念： 分馏法是利用中药中各成分沸点的差别进行提取分离的方法。一般情况下，液体混合物沸点相差100℃以上时，可用反复蒸馏法；沸点相差25℃以下时，需用分馏柱；沸点相差越小，则需要的分馏装置越精细。 2．应用：挥发油、一些液体生物碱的提取分离常采用分馏法。 原理：利用不同温度可引起物质溶解度的改变的性质以分离物质。a将不是结晶状态的固体物质处理成结晶状态的操作称结晶；b将不纯的结晶进一步精制成较纯的结晶的过程称为重结晶。 一溶剂选择的一般原则： 1不反应； 2冷时对所需要的成分溶解度较小，而热时溶解度较大；对杂质溶解度很大或很小； 3沸点低，易挥发； 4无毒或毒性小； 5若无理想的单一溶剂时，可以考虑使用混合溶剂； 6一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙酯等。 二、结晶操作： 结晶操作实际是进一步分离纯化过程：一般是应用适量的溶剂在加热至沸点的情况下将化合物溶解，制成过饱和溶液，趁热过滤去除不溶性杂质，放置冷处，以析晶。 三、结晶纯度的判定： 1、结晶形态和色泽：单一化合物的结晶具有结晶形状均一和均匀的色泽。 2、熔点和熔距：单一化合物具有一定的熔点和较小的熔距，结晶前后的熔点应一致，熔距很窄，在1℃(2℃的范围内。但要注意双熔点，如汉防己乙素、芫花素及一些与糖结合的苷类化合物。 3、色谱法：单一化合物在薄层色谱或纸色谱层析中经三种不同的溶剂系统展开，均为一个斑点者为单一化合物。 流动相：固定相饱和的氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱极性有机溶剂。 洗脱顺序：化合物极性越小，越先出柱；反之，化合物极性越大，越后出柱。 应用：通常用于分离水溶性或极性较大的成分，如生物碱、苷类、糖类、有机酸等化合物。 一、吸附色谱法 利用同一吸附剂对混合物中各成分吸附能力的差异而使各成分达到分离的色谱方法。特别适用于脂溶性中等分子量成分的分离。其中以固——液吸附用的最多，并有物理吸附（硅胶、氧化铝、活性炭为吸附剂进行的吸附色谱）、化学吸附（黄酮等酚酸性物质被氧化铝吸附、生物碱被酸性硅胶吸附