登革 2 型病毒特异性抗原片段的筛选及验证.PDFVIP

2012;32(11) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·1667 · 基础研究 登革2 型病毒特异性抗原片段的筛选及验证 任瑞文，唐博恒，张 培，胡文龙，洪文艳，刘建伟 广州军区疾病预防控制中心，广东 广州 510507 摘要：目的筛选、鉴定登革2 型病毒特异性抗原，为进一步研究其生物学功能奠定基础，并利用纯化抗原建立检测登革2 型病毒 抗体的ELISA 方法。方法 分别利用DNAStar 及ANTHEPROT 软件对登革病毒1-4 型、流行性乙型脑炎及黄热病毒M、E 蛋白 进行分析，分析登革2 型病毒型特异性抗原表位，并参考GenBank 中的序列信息进行比对，分析其在不同登革2 型病毒株中的保 守性。然后选择预测得分值较高的表位，利用pET32a 原核表达系统进行原核表达，Western blotting 验证其免疫学反应特异性， 特异性片段经亲和层析纯化后，包被ELISA 微孔板，并对ELISA 反应条件进行系统优化。结果 经系统的生物信息学分析，初步 预测获得登革2 型病毒特异性抗原表位8个，并对其中得分值较高的6 段进行了高效表达，经Western blotting 分析，获得登革2 型病毒特异性抗原片段1段。经纯化后作为检测用抗原，建立了检测登革2 型病毒抗体的ELISA 方法。初步应用表明，所建立 方法具备良好的特异性，可检测1~200倍稀释的患者血清，S/N 比值均在10以上。结论 获得登革2 型病毒特异性抗原片段1段， 并建立检测登革2 型病毒抗体的ELISA 方法。 关键词：登革2 型病毒；抗原表位；原核表达；ELISA 中图分类号：R373.33 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）11-1667-04 doi: 10.3969/j.issn. 1673-4254.2012.11.033 Screening and identification of dengue virus type 2-specific antigens REN Ruiwen, TANG Boheng, ZHANG Pei, HU Wenlong, HONG Wenyan, LIU Jianwei Center for Disease Control and Prevention of Guangzhou Military District, Guangzhou 510507, China Abstract: Objective To screen and identify dengue virus type 2 specific antigens and establish an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting dengue virus type 2 antibody. Methods Using the bioinformatic software DNAstar and ANTHEPROT, we analyzed the hydrophilicity, flexibility, surface probability and antigenicity of dengue virus type 1-4, Japanese encephalitis virus, and Yellow fever virus M and E protein amino acid sequences, and also evaluated the influence of secondary structure. The specific epitopes of dengue virus type 2 were predicted according to the epitope location and amino acid sequence similarity, and the epitope conservation was assessed using the sequence information of different dengue virus type 2 strains in