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新一代TALEN对比cas9的优势 上海斯丹赛生物技术有限公司  新一代TALEN操作比cas9更加简单容易  TALEN 比cas9更加精确  TALEN相比cas9总体而言，投入成本更 低，更便宜 ①新一代TALEN操作比cas9更加简单容易 做cas9需要对载体酶切，胶回收，而 TALEN可以实现一步连接。 新一代TALEN连接 1.设计序列， 选择模块 2.加样， 进行连接 4-5h完成 Cas9系统质粒构建 sgRNA设计和oligo合成 引物退火形成带粘性 末端的双链片段 线性化表达载体的制备 （酶切、胶回收） 双链oligo片段连接入 表达载体 ②TALEN 比cas9更加精确 很多的文章和报道都说明了cas9的脱靶 问题。 No evidence for TALEN off- targeting TALEN无明显脱靶效应 本文结合全基因组测序法，在6个细胞 系中分别对设计的TALEN靶序列在基 因组上可能的10万个脱靶位点处进行 了检测，均未发现任何脱靶效应；对 外显子区进行测序比对，未发现 TALEN存在脱靶效应。 Ding Q, Lee YK, Schaefer EA, et al. A TALEN genome-editing system for generating human stem cell-based disease models [J]. Cell Stem Cell, 2013, 12(2):238-51. TALEN对基因进行有效编辑时 未检测到任何的脱靶突变 在这项新研究中，研究人员通过采用 显微注射法将MECP2 靶向TALEN质粒 导入猴受精卵中，成功对MECP2 进行 了有效基因编辑，且未检测到任何的 脱靶突变。 Liu H, Chen Y, Ni Y, et al. TALEN-Mediated Gene Mutagenesis in Rhesus and Cynomolgus Monkeys[J]. Cell stem cell, 2014. Evidence for CRISPR/Cas9 off-targeting CRISPR-CAS9脱靶严重 结合对部分脱靶位点进行检测，发现6 处被研究的RGNs 靶位点中有4 处存在 脱靶效应。 CRISPR –Cas9脱靶如此严重，导致其 不适用于临床应用和治疗。 CRISPR –Cas9在多种细胞中存在普遍 脱靶。 Yanfang Fu, et al. High-frequency off-target mutagenesis induced by CRISPR- Cas nucleases in human cells [J]. Nat Biotechnol, 2013. Cas9脱靶效应无法避免 除了打靶位点，即使在 基因组的其他位置有某