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无菌操作技术 无菌操作技术 实验结果 试管 A B C D E F 生长状况 有单一菌落 无菌落 有多种菌落 显微镜下只能观察到大肠杆菌 无菌体 可观察到多种形态的菌种 简要说明 菌落边缘整齐，圆形，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰白色 未接种目的菌，也无杂菌污染 非无菌操作，有杂菌污染 两端钝圆的短小杆菌 未接种目的菌，也无杂菌污染 非无菌操作，有杂菌污染 注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。 3.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。 4．无菌操作需要在火焰旁进行，因此，在操作时要小心，不要将手烫伤。 5.禁止用嘴吸取菌液 6.用接种环将菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。 7.滴加染液要适中，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。 8.盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。 思考 因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。 如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 1. 高压蒸汽灭菌开始之前为什么要将锅内的冷空气排尽？ 思考 首先要记住：没有一种条件或培养基能使所有的微生物生长。本实验中所用的培养基是一种丰富培养基，可以支持大量不同的微生物生长，因此可以满足本实验的要求。 2.为什么用肉膏蛋白胨琼脂培养基？ 思考 答：防止菌种污染环境，违背无菌操作技术原则。 3. 为什么接种完毕后，接种环还必须灼烧后再放回原处，吸管也必须放进废物筒中？ 思考 答：1.产生的高温可以消灭细胞，避免细胞交叉污染 2.火焰的温度能够使气流形成负压，在酒精灯周围10cm处形成一个无菌区。 4. 为什么酒精灯外焰可以形成无菌区域 小结 1.获得试验成功的关键——牢固树立无菌概念，细心、认真体会无菌操作的要领。 2.了解掌握不同菌落形态 * 组员：赵华 赵诣 陈珩 杜宇菲 高宝才 高瑞钰 讲解：高宝才 PPT制作：杜宇菲 高瑞钰 资料查找人：赵华 赵诣 陈珩 无菌：在科学研究和生产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，不能存在杂菌（非目的菌）。 无菌操作 防止微生物进入机体或物体的方法 在微生物操作过程中，除了使用的容器、用具（试管、三角烧瓶、平皿和吸管等）和培养基必须进行严格的灭菌处理外，还要通过一定的技术来保证目的微生物在转移过程中不被环境中的微生物污染，这些技术包括用接种环（针）、吸管、涂棒等工具进行接种、稀释、涂片、计数和划线分离等。 实验目的 1.学习掌握培养基的配制原理，同时通过对几种培养基的配制掌握配 制培养基的一般方法和步骤。 2.了解高压蒸汽灭菌的原理和应用范围，学习高压蒸汽灭菌的操作技术。 3.证实实验室环境与人体表面存在微生物，体会无菌操作的重要性。 实验目的 4.熟练掌握从固体培养物和液体培养物中转接微生物的无菌操作技术，熟知各种菌种保藏方法，以及各个方法的特点和区别。 5.学习并掌握微生物的制片和简单染色的基本技术，初步了解细菌的形态特征。巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。 实验原理 1. 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 实验原理 2．高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内地冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时，由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100摄氏度的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的 实验原理 3．要知道我们周围存在看得见的微生物可以通过两种方法：一种是通过放大微生物个体，是我们能够看到它们；另一种方法是通过“放大”成子细胞群体（菌落），使我们看到它们的存在，即通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落。 实验原理 4. 高温对微生物具有致死效应，因此在微生物的转接过程中，一般在火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环（针、铲），以达到灭菌的目的，但一定要保证其冷却后方可进行转接，以免烫死微生物。如果是转接液体培养物，则用预先已灭菌的玻璃吸管或吸嘴；如果只取少量而且勿需定量也可用接种环，视实验目的而定。 实验原理 5.通过分离纯化得到的微生物纯培养物，还必须通过各种保藏技术使其在一定时间内不死亡，不会被其他微生物污染，不会因发生变异而丢失重要的生物学形状