细胞转染技术-宋晓萍培训材料.pptVIP

细胞转染技术 汇报人：宋晓萍 2015.5.9 目录 1 影响转染实验的因素 转染方法 将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。 细胞转染—— 研究内容：研究和控制真核细胞基因功能 应     用：基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验 常规转染技术 外源 DNA 既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。尽管线性 DNA 比超螺旋 DNA 转入量低但整合率高。外源 DNA 整合到染色体中概率很小，大约 1/104 转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素 B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒 DNA 转染效率较高，在转染后 24-72 小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果， 常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β 半乳糖苷酶等来帮助检测。 脂质体介导转染 脂质体转染的原理基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内。 1.  promega公司   Promega转染试剂产品适合于人HeLa，