铍试剂!线性扫描伏安探针法测定蛋白质-应用化学.PDF

第"" 卷 第* 期 应 用 化 学 7/K8 "" M/8 * "$$= 年* 月 ! ! ! :’OM;9; WGL2M<B GZ <RRBO;T :’;[O9\2]! ! ! [J,8 "$$= 铍试剂 线性扫描伏安探针法测定蛋白质 ! ! ，" # ! ! " 孙! 伟 ! 韩军英 ! 焦! 奎 ! 陆路德 ! " （青岛科技大学化学与分子工程学院! 青岛"##$%" ；南京理工大学化工学院! 南京） 摘! 要! 根据在&’ ( %) * 的+,-../012/3-04/0（+12 ）缓冲溶液中铍试剂 与蛋白质能够反应生成稳定的超分 ! 子复合物，使铍试剂 在5 $) %6 7（#$ 8 9:; ）处的伏安还原峰峰电流下降而峰电位基本保持不变的性质，建立 ! 了蛋白质的二阶导数线性扫描伏安测定方法。在最佳条件下，峰电流的下降值同人血清白蛋白（’9< ）的浓度 在=) $ > =$) $ ?@A B 范围内呈线性关系，线性回归方程为 %C （0< ）( %D) 6* E *) #=& （?@A B ），( $) DD# # 。此法 " & ! 应用于实际人血清样品的测定，结果与经典的考马斯亮蓝F1"=$ 光度法一致。 关键词! 蛋白质，铍试剂 ，线性扫描伏安法 ! 中图分类号：G#=H 8 I! ! ! ! ! 文献标识码：<! ! ! ! ! 文章编号：I$$$1$=I6（"$$= ）$*1$"%"1$% 蛋白质常见的分析方法有染料结合光度法、荧光法、光散射技术等［I > = ］。生物大分子的电化学行为 研究及电分析测定是近年来的研究热点，它具有操作简单、快速、干扰小、灵敏度高等特点，本课题组采 用小分子探针研究蛋白质并应用于蛋白质的电化学测定［# > 6 ］，已取得了较好的结果；但用铍试剂 作为 ! 电化学探针测定蛋白质的研究尚未见报道。铍试剂 是一种偶氮结构的生物染色剂，其分子结构中含 ! 有大的亲水基团如磺酸基团等，易溶于水，已被用于光度法测定蛋白质的研究［D ］。实验发现，在酸性条 件下铍试剂 与蛋白质发生结合反应生成稳定的超分子复合物。本文采用电化学分析的手段对该结合 ! 反应进行了研究，优化了反应条件，所建立的方法可应用于常见蛋白质的测定，用于健康人血清样品中 蛋白质含量的测定，结果令人满意。 !" 实验部分 !8 !" 试剂和仪器 人血清白蛋白（’9< ，9-@?J 公司），牛血清白蛋白（+9< ，9-@?J 公司），牛血红蛋白（+’3 ，天津市川 叶生化制品有限公司）；蛋白质标准溶液均为水溶液，% U 冰箱保存。I) $ V I$ 5 * ?/KA B 铍试剂 储备液， ! 使用时再进行稀释；$) " ?/KA B +,-../012/3-04/0（+12 ）系列缓冲溶液；考马斯亮蓝F1"=$ （上海化学试剂 站分装厂进口分装）；正常人血清样品（青岛科技大学校医院提供）。所用试剂均为分析纯，试验用水为 二次石英蒸馏水。WR1*$* 型极谱分析仪（成都仪器厂），三电极系统：滴汞电极为工作电极，饱和甘汞电 极（9:; ）为参比电极，铂丝电极为对电极；:J,X =$ &,/3Y 型紫外可见分光光度计（澳大利亚7J,