降糖三黄片对糖尿病大鼠肾脏病理形态学改变的影响.DOCVIP

降糖三黃片對糖尿病大鼠腎臟病理形態學改變的影響 陳雲１指導：李賽美2 （1, 香港註冊中醫　醫學博士；2, 廣州中醫藥大學傷寒教研室） 廣東省科技廳攻關項目（編號：2008B060600073） 【摘要】目的：觀察中藥降糖三黃片對糖尿病大鼠腎臟病理改變的影響。方法：SPF級Wistar大鼠，隨機分為正常組、模型組、中藥組和西藥組，採用高脂飼料加少量STZ腹腔注射複製2型糖尿病大鼠模型，造模成功後進行8周給藥，中藥組以降糖三黃片（劑量按787.5mg.kg-1.d-1），西藥組以開博通（劑量按4mg.kg-1.d-1）。8周後處死大鼠取腎組織，光學顯微鏡及電子顯微鏡下觀察腎臟組織形態及超微結構變化，並測定腎小球的平均體積，腎小球毛細血管增生厚度。結果：模型組及西藥組的腎小球硬化指數、腎小球毛細血管基質增生程度均高於正常組和中藥組（P0.05;P0.01）。結論：中藥組對於改善腎小球毛細血管基質增生和腎小球硬化方面療效明顯，其作用機制可能是通過減少細胞增生而減少ECM蓄積、減輕腎小球硬化，達到延緩DN的腎臟損害。 【關鍵詞】降糖三黃片糖尿病腎病腎小球硬化細胞外基質 糖尿病腎病（Diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最主要的微血管病變之一，是導致終末期腎功能衰竭的重要原因。DN的特徵性病理變化是早期腎小球高灌注、腎小球肥大、系膜區擴張、基底膜增厚及細胞外基質堆積，以致腎小球硬化、腎間質纖維化，最終導致DN的发生和发展[1]。本研究旨在觀察降糖三黃片對糖尿病大鼠腎組織形態學變化的影響，探討降糖三黃片防治DN的作用機理，為臨床防治提供實驗依據。 1 材料及方法 1.1 主要藥品、試劑降糖三黃片為廣州中醫藥大學院內製劑（批號：粵；鏈脲佐菌素（STZ）由Sigma公司生產；卡托普利片（商品名：開博通），中美上海施貴寶製藥有限公司生產（批號：0906032）。 1.2 實驗儀器透射電子顯微鏡（Philips EM208s TEM）；光學顯微鏡（Olympus BX60型）；LKB-V型超薄切片機（瑞典）；全自動顯微照相裝置（Olympus PM-10AO）。 1.3 動物模型建立SPF級Wistar大鼠，體重50~70g（廣東省實驗動物檢測所，合格證：001號）；所有大鼠普通飼料（總熱量6.94J/g，其中蛋白質23%，碳水化合物53%，脂肪5%購自廣東省實驗動物中心）適應性餵養2周後，隨機分為2組，造模組改用高脂飼料（總熱量4.9kcal/g，其中蛋白質20%，碳水化合物35%，脂肪45%，蛋氨酸按1％比例添加，購自廣東省實驗動物中心）餵養一個月。造模前禁食12h，造模組按30mg/kg劑量腹腔內注射STZ，正常組腹腔內注射等量檸檬酸緩衝液。1周後，測定空腹血糖（FBG）和空腹胰島素（FINS），計算胰島素敏感指數〔ISI，ISI=In（FINS×FBG）-1〕。連續兩次空腹血糖≥11.1mmol/L，查尿糖++以上，胰島素敏感指數降低，且出現多飲、多尿、多食現象，確認為2型糖尿病模型。 1.4 分組及給藥Wistar大鼠隨機分為正常組（n=10）與造模組（n=34）。造模成功的大鼠進一步隨機分為模型組（n=10）、中藥組（n=12）、西藥組（n=12）。中藥組予以降糖三黃片按787.5mg.kg-1.d-1的劑量給藥，西藥組予以開博通按4mg.kg-1.d-1的劑量給藥，正常組及模型組灌服等量蒸餾水。觀察期為8周。 1.5 觀察方法與檢測指標 1）於8周末禁食不禁水12h，以3.3ml/kg劑量腹腔注射10%水合氯醛麻醉動物，腹主動脈取血，同時摘取腎臟，觀察兩腎大體外觀，右腎去包膜稱重，取一部分腎皮質切成小塊，以2.5%戊二醛/0.1M二甲胂酸鈉緩衝液（pH7.4）固定後製備電鏡標本。部分腎臟皮質以10%福爾馬林液固定，用於光學顯微鏡標本的製備。 2）觀察指標和方法： （1）光鏡樣品製備：病理組織標本經取材、固定、修塊、流水沖洗、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋後，石蠟切片，HE染色、封片。把製作好的HE染色切片置於光學顯微鏡下，從低倍到高倍，觀察各個臟器的病理變化。用Image-Pro Express C圖像分析系統進行腎小球的平均橫截面積定量指標分析。腎小球平均橫截面積，以每個腎臟組織隨機測量15個腎小球的橫截面積，取均值。 （2）電鏡樣品的製備:切取橫截面lmm2，長1cm的腎臟組織塊，以3%戊二醛固定，LKBⅢ型切片機超薄切片，透射電鏡觀察腎小球基底膜的厚度，系膜基質及足突變化情況，並攝像。 1.6 統計學方法 等級資料用秩和檢驗法。計量資料以均數±標準差（±s）表示。採用統計學套裝軟體SPSS13.0進行統計分析，多樣本均數間比較採用one-way ANOVA檢驗，組間比較採用LSD檢驗，P0