逆流色谱法.ppt

7.4 逆流色谱法（CCC） 逆流色谱法（CCC）：基于样品在两种互不混溶的溶剂之间的分配作用，溶质中各组分在通过两溶剂相过程中因分配系数不同而得以分离。这是一种不用固态支撑体的全液体色谱方法。 7.4 逆流色谱法（CCC） 7.4.1 液滴逆流色谱(DCCC) 7.4.2 旋转小室逆流色谱(RLCC) 7.4.3 离心逆流色谱法 7.4.4 高速逆流色谱法(HSCCC) 7.4.1 DCCC (液滴逆流色谱) 7.4.1 DCCC (液滴逆流色谱) 7.4.2 旋转小室逆流色谱 7.4.3 离心逆流色谱法 7.4.3 离心逆流色谱法 7.4.4 高速逆流色谱法 7.4.4 高速逆流色谱法 7.4.4 高速逆流色谱法 7.4.4.1 高速逆流色谱仪 7.4.4.2 实验操作 7.4.4.2 实验操作 7.4.4.3 PH-区带-提取逆流色谱法 7.4.4.4 手性分离 * * DCCC (液滴逆流色谱): 是在逆流分溶法基础上创建的色谱装置，可使流动相呈液滴形式在固定相间交换，促使溶质中各组分在两相之间进行分配，达到分离效果。 缺点：流动相流速低，每小时只有十几毫升；分离过程 长，一般需要几十小时才能完成一次几个组分的分离． 旋转小室逆流色谱 rotational little-chambercounter-current chromatography, RLCC 用中心有一小孔的聚四氟乙烯园盘将分离柱管分隔成若干连通的小空间，再将若干根这样的柱管排列在圆形转盘架上，柱管之间用聚四氟乙烯管串联起来。溶剂通过旋转密封接头进出这组分离柱管。所有柱管以一定的转速和倾角绕转盘中心轴转动。流动相进入第一个小室后，就会取代其中原已注满的固定相的位置，直到流动相液面达到圆盘上小孔的水平时，流动相就会穿过小孔进入下一个小室，并依次从一根柱管进入另一根柱管。随着流动相逐步穿过各个小室，带动样品在各个小室的两相间分配。 7.4.2 旋转小室逆流色谱 离心逆流色谱法：仪器工作的时分离柱要绕中心轴在设备中高速转动，因为高速旋转产生的离心力可使两相剧烈地反复混合分层，实现快速高效的分离。 7.4.3.1 非行星式逆流色谱仪：主要包括分离柱室螺旋管式和非螺旋管式，主要是匣盒式离心逆流色谱仪。 7.4.3.2 行星式逆流色谱仪：分离柱几乎全是利用聚四氟乙烯管绕成的螺旋线圈。 高速逆流色谱技术(HSCCC)是一种不用任何同态载体的液．液色谱技术，其原理是基于组分在旋转螺旋管内的相对移动而互不混溶的两相溶剂间分布不同而获得分离，其分离效率和速度可以与HPLC相媲美。 混合区：在靠近离心轴心大约有四分之一的区域，两相的激烈混合 静置区：两相溶剂分成两层，重相在外部，轻相在内部 以1000转/分的速率进行旋转，在二维力场的作用下分离管柱内混合和传递的频率可达到17次/S，从而实现高效的分离 Cs Cm K ＝ Cs/Cm HSCCC的工作流程 PUMP:恒流泵 HSCCC centrifuge: 离心机 Detecter:检测器 （1） 溶剂的选择：最有效的溶剂组合应是样品在其中的分配系数0.2-5，最好接近1，同时，是两相的分层时间尽可能短。 选择溶剂种类和配比的方法：a.参比已有的溶剂系统 b.高效液相色谱法 c.薄层色谱法 d. 生物活性分配比法 （2） 样品溶液的制备：样品溶液制备主要考虑样品的溶剂，样品量以及样品体积的大小。 （3） 分离：两相溶剂系统不需要脱气，但使用前必须互相饱和。 （4） 检测：目前较为常用的是紫外检测器。重要的是保证基线的稳定。 PH-区带-提取逆流色谱法：用于有机酸或碱的分离。通过在固定相中加入酸（或碱），将样品各组分保留在柱管内，而流动相中加入碱（或酸）来根据各组分的PKa和疏水性把这些组分逐一洗脱出来。 手性分离：通过向固定相和流动相中加入手性试剂，可以采用HSCCC实现手性制备的目的，手性试剂的选择至关重要，最好它溶解于固定相或流动相中（报道非常有限）。 * * *